重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内同源重组AdEasy System）一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4. 用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5. 胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二 共转化1 大肠杆菌BJ5183电转感受态制备² &nb......阅读全文
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内同源重组AdEasy System）一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3.
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作
PCR体外扩增法 实验方法原理 Adeasy系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作
重组DNA技术可以用于：（1）据需要选择目的基因（DNA片段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的；（2）是现代分子生物技术发展中最重要的成就之一，即是基因工程(Gene Engineering)的核心技术。实验方法原理Adeasy系统利用了
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内...
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作（细菌内同源重组AdEasySystem）实验材料 腺病毒试剂、试剂盒 PmeI酶琼脂糖LB培养基甘油液氮SOC卡那霉素PacI酶Lipofectamine无血清培养基DMEM完全培养基PBSCsCl病毒裂解上清液矿物油仪器、耗材 恒温摇床分光光度计恒温水浴锅E
什么酶重组等温扩增技术？
通过模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定重组酶、外切酶、聚合酶等多酶体系进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进行优化组合,从而获得核心的重组等温扩增体系,建立特殊扩增反应体系,在37-42℃恒温条件下,可将微量DNA/RNA的特异性区段在数分钟内扩增
RACE技术扩增构建全长cDNA文库
实验概要利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法，进行全长C库的构建，从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。实验原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签，用通用引物识别并配对标签序
重组蛋白纯化的基本策略
及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段 捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。 中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。 精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。 分离方法的选择 根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法：蛋白质
基本方案－运用－AdEasy－方法产生重组腺病毒载体
实验材料感兴趣的基因试剂、试剂盒具有卡那霉素抗性的 LB 培养基限制性内切核酸酶穿梭载体 DNA乙酸铵苯酚 氯仿 异戊醇乙醇电促感受态 BJ5183 细胞感受态 DH10B 细胞HBSS 或灭菌的 PBS仪器、耗材铺有卡那霉素抗性的 LB 固体培养基皿琼脂糖凝胶脂质转染 AMINE 试剂Opti-M
重组质粒的构建
[实验原理]外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA
重组酶聚合酶扩增（RPA）技术简介
核酸检测革命：可替代PCR的犀利技术——RPA重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA
重组蛋白[Recombinant－Protein]纯化的基本策略
一、融合表达蛋白的纯化：融合表达蛋白可以在原目标分子之外带有GST肽段或（His）6肽段，从而使得可以分别用Glutathione Sepharose凝胶或Chelating Sepharose凝胶进行亲和色谱分子，一步可以达到~90%的纯度，经过特异蛋白酶切后，再进行离子交换及高分辨凝胶过
关于腺病毒包装技术的技术要点介绍
重组腺病毒的包装制备：重组腺病毒是从由侵染色斑组成单位（pfu）中分离获得的。一个单色斑是线性载体质粒转染后在20×15 cm板上由293A细胞连续侵染后被挑选和扩增形成的。重组腺病毒可通过超速离心纯化，并测定滴度及进行PCR鉴定。纯化后重组腺病毒的滴定浓度为1010pfu/ml，获得的量为2-
RPA（重组酶聚合酶扩增）技术原理及RPA与LAMP对比
英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增ZL技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。(http://www.twistdx.co.uk)
病毒感染细胞实验（一）
实验方法原理 一、病毒的种类病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使
酶促重组等温扩增技术（ERA）的应用介绍
1、研究诊断领域:针对细胞培养中的支原体污染,提供一种快速、简单、灵敏的检测方法,只需要20分钟便能得出结果2、公共卫生领域:针对危害公众健康的呼吸道传染性病原,肠道致病病原及生殖系统病原进行快速检测3、食品安全领域:针对致病微生物、动物源性成分和转基因农产品进行快速现场检测4、农业生产领域:针对水
酶促重组等温扩增技术（ERA）的反应原理
1、重组酶首先与上下游引物结合,寻找同源双链DNA,一旦定位发生链交换2、同时SSB蛋白与亲本链绑定,阻止其与其脱离的模板链发生相互作用3、DNA聚合酶从上下游引物的3”端启动合成,形成两条双链DNA,如此循环重复扩增
什么叫重组腺病毒质粒
就是序列数据经过拼接后得到了完整的质粒全序列
腺病毒的包装，纯化和感染
1腺病毒的包装，纯化和感染技术背景：Adeasy 系统利用了腺病毒具有的高感染能力，可高度浓缩等优点，并破坏了腺病毒基因组中的早期基因E1，使之成为较为安全、高效的病毒载体。利用带有E1 基因的293 细胞作为包装细胞，通过倍比扩增，富集病毒颗粒，并通过CsCl 梯度离心，透析进行分离纯化。对绝大多
重组DNA技术的基本定义
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
重组DNA技术的基本定义
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
重组DNA技术的基本定义
重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
基因工程的基本定义
狭义上仅指基因工程。是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传，表达出新产物或新性状。重组DNA分子需在受体细胞中复制扩增，故还可将基因工程表征为分子克隆（Molecular Cloning）或基因克隆（Gene Cloning
twistDx－的重组酶聚合酶扩增（RPA）技术原理
twistDx 的重组酶聚合酶扩增（RPA）将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。RPA 技术原理RPA 体系的重点是重组酶，这些酶与寡核苷酸引物形成复合体，并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合（SSB）蛋白与被取代的 DNA 链结合，并使形成的 D 环保
重组质粒的构建设计
基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞，使外源DNA 在受体细胞中进行复制和
重组质粒的构建设计
基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞，使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达。按人们
重组质粒的构建设计
基因工程基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程，就是在分子水平上，用人工方法提取（或合成）某一生物的遗传物质，在体外切割，拼接和重新组合，然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞，使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达
关于重组－5－型腺病毒疫苗的介绍
重组Ad5疫苗是最早被研究的重组活载体疫苗，也可能是 EDV 疫苗平台中最为领先的疫苗， 被证明在非人灵长类中可提供有效保护。早期研究 中，对非人灵长类首次免疫可表达 EBOV GP的DNA 疫苗，再加强免疫可表达 GP 的人 Ad5疫苗， 可保护机体免遭致死性 EBOV 的攻击，首次证明了通过
重组新冠疫苗（腺病毒载体）的介绍
重组新冠疫苗（腺病毒载体）是一种表达SARS-CoV-2刺突糖蛋白（S蛋白）的复制缺陷Ad5载体疫苗。疫苗使用一种减毒的普通感冒病毒（腺病毒，易感染人类细胞，但不致病）将编码SARS-CoV-2刺突（S）蛋白的遗传物质传递给细胞。随后这些细胞会产生S蛋白，并到达淋巴结，免疫系统产生抗体，识别S蛋
基本方案1－尾静脉注射传递重组腺病毒到小鼠肝脏
实验材料成年小鼠试剂、试剂盒乙醇重组腺病毒悬液仪器、耗材带铁丝盖的鼠笼加热灯小鼠限制器棉纱店注射器实验步骤1.一个鼠笼装 6 只小鼠，加热灯置铁丝盖上方 6~10in(15~25 cm) 给小鼠取暖。观察小鼠，约 5 min 后，它们会在角落里缩做一团，准备注射。不要在角落的位置照射小鼠。2.取一只
酶促重组等温扩增（ERA）的原理和核心技术
酶促重组等温扩增技术(ERA技术)是一种等温核酸扩增技术,它是利用抗体制药领域先进的Molecular Design、Directed Evolution、Affinity Maturation 等技术手段,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进