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如何对cDNA、gDNA进行选择性引物设计?

设计策略PS:该方法适用于检测或部分 DNA 片段克隆,不适合全长基因克隆反转录 PCR 的主要问题是基因组 DNA (gDNA) 污染的存在,这将导致产生假阳性信号,特异性降低或对特定 RNA 的过高估计。为了消除 RT-PCR 中 gDNA 的干扰,可将引物设计为与两个外显子的接合部退火,该点为 cDNA 序列专有,因此 gDNA 将不能被扩增。cDNA 特异的引物可通过三个途径设计(如下图所示)。cDNA、gDNA选择性引物设计原理图1. 引物横跨外显子-外显子接合部。设计的引物如果一半与一个外显子的 3'端结合,而 另一半与相邻外显子的 5'端结合,它将只与 mRNA 或由已剪切的 mRNA 合成的 cDNA 退 火,而不与 gDNA 结合,因而可以避免对 gDNA 污染的扩增。正向或反向引物都可设计为 横跨外显子接合部;而另一个引物可设计为结合于另一个外显子接合部或在完全位于外显子 内部的位点上。2. ......阅读全文

如何对柱效进行评价

实验仪器与试剂仪器:高效液相色谱仪(带自动进样器,或配置微量进样器)、分析天平。试剂:苯、萘、联苯(均为分析纯)、甲醇(色谱纯)、纯净水。实验步骤色谱条件:色谱柱:C18,4.6×150mm,5μm;流动相:甲醇-水(80:20,v/v);检测波长:254nm;流速:1mL·min-1;柱温:30℃

如何对提取的DNA纯化

质粒DNA的提取、纯化和电泳检测摘要本实验通过碱变性法提取E.coli DH5α(pUC19)的质粒DNA,并且通过一系列的分离纯化技术将其质粒DNA与染色体DNA、RNA、蛋白质等杂质分开从而得到纯化的质粒DNA分子。通过琼脂糖凝胶电泳可以通过DNA条带的位置来大致判断其分子大小,也可以将实际电泳

如何对移液器进行定期保养

  移液器是进行生化实验或分子生物学实验的必备工具。正确使用可调微量移液器,防止操作过程仪器器具所造成的系统误差,提高检测结果的精密度和准确性。  移液器的使用  设定移液量:移液器为一活塞式吸管,利用空气排放原理进行工作,以活塞在活塞套内移动的距离确定移液器的容量。移液器的容量即移液量,在移液把柄

如何对钠电极进行维护

在一些养殖场还有电厂和造纸厂中,都会用到这种钠电极的仪器。它与酸碱度计一样,都是用来测量相关成分的数据值仪器,可以给各大行业提供最精确的数据,并且可以更好的执行这种标准。 对于这种钠电极来说,它的是属于一种复合型的电极,所以使用起来十分的方便。对于这种常用于测量的仪器来说,应当如何进行对其的维护和保

如何降低离子对试剂对色谱柱的损伤

色谱柱保存,要避免的是两点:细菌滋长导致的发霉以及因保存溶剂挥发导致的填料变干。有机相成分有杀菌作用,在保存试剂中含量不能太低;但100%有机相或接近100%有机相,因为挥发性太强也不好。所以80%上下甲醇含量的甲醇水作为保存溶剂是适宜的。当然,无论选什么作为保存试剂,色谱柱两端的Peek堵头是一定

如何对球状体进行染色?

虽然很多荧光试剂和探针可以通用,但由于3D细胞培养形成的球状体或类器官比2D单层细胞更致密,所以染料浓度和染色时间需要进行优化。如果对固定、破膜后的球状体进行免疫染色,在抗体染色液中加入5% DMSO可以降低背景染色。

如何对弹簧拉力计进行校正

  拉力计跟天平一样也要定期对它进行校正,确保测量的准确性,下面我们就来说说如何对弹簧拉力计校正:    1.在竖直方向测量向下的力时弹簧拉力计的校零,在竖直方向上,弹簧拉力计向上拉物体,测量物体的重力或其它测力时,应手拿弹簧拉力计的外壳,使弹簧拉力

如何对高温电炉炉衬厚度检测

 以下是关于高温电炉炉衬厚度检测的简单介绍,我们来一起了解一下;  高温电炉炉衬是个比较重要的部分,它的质量的好坏和厚薄对于电炉的使用有比较大的影响。炉衬是指用于对金属进行精炼的炉子的炉壁,使用耐高温陶瓷制成。高温电炉炉衬的使用寿命直接影响了高温电炉的整体使用寿命。  检测高温电炉的炉衬厚度有以下2

如何避免静电对仪器的损坏?

静电大家应该不陌生,小到生活中大到设备实验中静电可以说是无处不在。可千万别小瞧静电的威力额!!下面安泰仪器维修中心分享如何避免静电对测量仪器的伤害?人体在未做有效的防静电措施的情况下,身体和衣服上经常带1000V到5000V的静电。只要构成通路,积累的静电就会放电。由于在极短的时间内释放出大量的能量

如何对露点仪的测量

露点仪测量条件的选择在露点仪的设计中要着重考虑直接影响结露过程热质交换的各种因素,这个原则同样适用于自动化程度不太高的露点仪器操作条件的选择。这里主要讨论镜面降温速度和样气流速问题。1.被测气体的温度通常都是室温。因此当气流通过露点室时必然要影响体系的传热和传质过程。当其它条件固定时,加大流速将有利