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增强化学发光法(ECL)

Ecl 显色原理:鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中,含有H2O2和鲁米诺,在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下,发出荧光来。试验步骤:1)将两种显色底物1:1等体积混合(一般各1ml/membrane)。2)将混合物覆盖在膜表面,1-2分钟,摇晃使均匀。3)用保鲜膜把膜包起来,放入夹板中。4)在暗室中将X光片,覆盖在膜的上面,夹好夹子,曝光1min。5)显影、定影。6)根据结果调整曝光时间和曝光区域,得到最佳结果。注意:荧光在一段时间后会越来越弱。记得全程手套操作,一则避免手印污染影响结果,二则保护自己(未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体)1. 如果WB前没有可参考的资料--比如不知道是否有表达,比如抗体少还要摸条件(稀释度),可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件,省点时间省点试剂;2. 去掉积层胶后,预染的Marker可用以识别胶上下方向和膜的正反面(预......阅读全文

化学发光免疫分析系统分类介绍

什么是化学发光化学发光:在常温下由化学反应产生的光,产生电子能级处于激发态的物质,后者通过跃迁释放能量产生光子,从而导至的发光现象。化学发光是一个多步骤的过程。      化学发光按照发光时间可以分为:闪光(Flash): 发光时间在数秒内

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯

全球学者献技 ICAS 2017 光谱分析分会场被拉曼“占领”

  分析测试百科网讯 2017年5月7日,由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)和中国化学会(CCS)主办的2017 年国际分析科学大会(ICAS 2017)光谱分析分会场的报告继续进行。分析测试百科网注意到,本届光谱分析分会场的报告从数量上来说,主体为拉曼及相关技术。光谱分析分会场主持人,韩国汉

基于碳纳米管修饰电极的胆碱电化学发光生物传感器研制

  电化学发光(ECL)分析法由于其可控性好、灵敏度高、选择性好、仪器简单等优点已成功应用于环境科学、生命科学和材料科学等领域。鲁米诺是常用的发光试剂,它具备很好的发光性能,尤其是对活性氧有良好的响应,可作为酶催化反应的信号输出,以研制ECL生物传感器〔1~3〕。诸多酶催化反应的产物为H2O2,可以

十二烷基磺酸钠-盐酸维拉帕米-联吡啶钌体系电化学发光

  1 引言   盐酸维拉帕米(Verapamil hydrochloride,Yswlpm),是临床常用的抗心律失常、抗心绞痛和治疗高血压病的钙通道阻滞剂药物。目前,测定盐酸维拉帕米主要有分光光度法〔1〕、高效液相色谱法〔2,3〕、高效毛细管电泳法〔4〕及流动注射化学发光法〔5〕,尚未见

电化学发光法对水产品中腐胺的研究

  腐胺(putrescine, Put)属多价生物胺,化学结构为1, 4-丁二胺,是生物活体或尸体中鸟氨酸脱羧在鸟氨酸脱羧酶的作用下的降解产物[1]。腐胺作为一种腐毒碱存在于腐败物中,适量的腐胺可以促进组织生长,过量的腐胺不仅能加强生物胺的毒性,而且还会与亚硝酸盐反应生成杂环类致癌物[2]。因此,

免疫印迹法实验原理和常见故障分析

 免疫印迹法(western blot) 原理:    通过电泳区分不同的组分,并转移至固相支持物,通过特异性试剂(抗体)作为探针,对靶物质进行检测,蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点,可检测到低至1~5n

第八届全国微全分析系统学术会议微全分析专场

  2013年5月16日-19日,由中国化学会主办、厦门大学承办、复旦大学、浙江大学协办的为期四天的第八届全国微全分析系统学术会议、第三届全国微纳尺度生物分离分析学术会议暨第五届国际微化学与微系统学术会议在美丽的海滨城市厦门隆重召开。以下是微全分析专场报告。上海交通大学

Southern blot对动物细胞基因组DNA中小卫星多态性的检测

实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA中小卫星多态性Southern blot检测的原理和操作步骤。掌握核酸杂交检测技术(Southern blotting技术)、核酸探针的标记技术、小卫星DNA多态性检测分析技术(DNA 指纹图谱技术)和化学发光检测技术。实验原理Southern印迹杂交技术包括

免疫印迹(Western blotting)实验原理、试剂和操作步骤

(一)原理Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素(NC)膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后,将蛋白转移至膜上,再与特异性抗体孵育,洗去游离的抗体,然后和酶标记的二抗孵育,再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好,亲合力高,Western blot检测的灵敏度较高,尤其是采用

高架十字迷宫实验相关:-复方抗焦虑胶囊对急...(二)

2方法2.1造模与分组大鼠单笼饲养,将大鼠随机分为空白组、模型组、胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药物组,共6组,每组8只。其中低、中、高剂量组分别按0.75、1.5、3g·kg-1·d-1给予灌胃,DZP组给予1.0mg·kg-1·d-1灌胃,空白组和模型组灌服等容积的生理盐水,连续7d灌胃

时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)

时间分辨荧光免疫分析(Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术,它用镧系元素标记抗原或抗体,根据镧系元素螯合物的发光特点,用时间分辨技术测量荧光,同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高了分析灵敏

药物活性测试技术—AlphaScreen

近年来在生命科学领域中兴起的新技术——Alpha,是一种基于增强的化学发光的均相免疫技术,已广泛用于各项生物实验的研究,包括应用于药物活性测试。Alpha技术包括AlphaScreen和AlphaLISA技术, 两种方法都使用同一种供体微珠,但使用不同的受体微珠。AlphaScreen技术是基于

药物活性测试技术—AlphaScreen

  近年来在生命科学领域中兴起的新技术——Alpha,是一种基于增强的化学发光的均相免疫技术,已广泛用于各项生物实验的研究,包括应用于药物活性测试。Alpha技术包括AlphaScreen和AlphaLISA技术, 两种方法都使用同一种供体微珠,但使用不同的受体微珠。   AlphaScreen技