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提质粒是分子生物学中基本，easy的实验。完全不需要借助大脑，直接照着提取试剂盒中的操作说明傻瓜操作即可（其实应该由机器人在实验室中操作这些简单却耗时的实验）。尽管操作简单，提质粒却也是一个比较重要的步骤，提出质粒的质量和数量将直接决定着后续实验室的成败。当我们按照试剂盒中操作说明进行操作时，我们会看到P1，P2，N3, PE，EB等不同的溶液（不同试剂盒可能标识不同）。那么大家是否知道每瓶溶液中装的什么？它们在质粒提取过程中的作用又是怎样的？ 质粒提取采用的是强碱裂解法（alkaline lysis），那么我们现在来看一下溶液 P1 ， P2， N3, PE, EB都是什么。 溶液1（P1） 组分浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡糖糖（Glucose） 溶液1的主要作用是将菌体沉淀悬浮起来。25mM Tris-HCl是缓冲溶液，保证反应体系的pH恒定......阅读全文
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
实验方法原理 与制备用化学方法进行转化的感受态细胞相比，制备电转化的感受态细胞要容易得多。细菌简单地生长至对数中期、冷却、离心，用冰冷的水或缓冲液充分洗净以降低细胞悬液的离子强度，而后再用含 10% 甘油的冰冷缓冲液悬浮。实验材料 质粒 DNA试剂、试剂盒 甘油纯水SOC 培养液仪器、耗材 CYTL
实验方法原理 转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。也是细菌
材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用，而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框，进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新
实验步骤 一、材料 所有化学试剂均为分子生物学级纯度。所用塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸头均经高压蒸气灭菌。涉及核酸的操作均需带手套。 1.总 RNA提取 （1）无 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙
大肠杆菌的电击转化实验可以用于：更为简便快捷地进行转化。实验方法原理转化（transformation）是某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型的细胞的DNA而使它的基因型和表型发生相应变化的现象。该现象首先发现于细菌。也是细菌间遗传物质转移的多种形式中最早发现的一种，它不同于通过噬菌体感染
第一节 概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式，不通过活细胞，操作