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酵母菌基因组转座子的诱变实验—小载体聚合酶链反应

实验材料诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒锚定囊泡引物1和2 、1 mol L MgCl2、普通小载体（UV)和mTn引物、转座子诱变酵母菌株、合适的限制性内切核酸酶（如AZmI或DraI)和缓冲液、10×T4 DNA连接酶缓冲液、5 mmol L ATP、400 U μL T4 DNA连接酶（检测于黏合末端连接单位）、5 U μL Tag DNA聚合酶和1O×缓冲液、2.5 mmol L 4 dNTP 混合液仪器、耗材加热块、自动化热循环控制仪实验步骤1)准备小载体PCR，合成锚定囊泡引物。形成锚形囊泡如下：a.配置一种水溶液，这种溶液中含有2〜4 mmol/L的每种锚定囊泡引物1和2。b.在加热块上以95℃孵育5 min变性。c.加入1 mol/L MgCl2至溶液终浓度为2 mmol/L通过从底部装置撤掉加热块并将其放在试验台上直至冷却到室温使其变性。-20℃储存至第5步。2)合成普通小载体（UV)引物。合成与产生......阅读全文