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样品制备将人血浆收集到含有EDTA和蛋白酶抑制剂的试管中，以防止体外形成缓激肽。使用Oasis WCX（一种混合型吸附剂）进行SPE提取，提高提取的选择性。此吸附剂依靠反相和离子交换保留机制将复杂血浆样品中的缓激肽与其它高丰度多肽选择性地分离开来。Oasis μElution96孔提取板可在无需蒸发和复溶的条件下富集样品。这不仅节省了时间，还减少了由于蒸发过程中收集板壁的吸附而导致的肽损失。预处理和清洗步骤的优化对于在样品预处理和SPE提取中完全回收缓激肽至关重要。使用酸或碱对样品进行预处理可降低粘度并增加与吸附剂的接触时间，有利于抑制蛋白质结合，还可以通过离子交换功能使肽在SPE设备中得到更好的保留。在最初的方法开发中，通过用酸预处理血浆获得了约80%的回收率。由于缓激肽是一种碱性的极性肽，其PI值为12.0，HPLC指数为47.8，因此怀疑它在最初的上样步骤中发生了部分洗脱。当使用碱进行预处理时，回收率增加至约9......阅读全文
预分析收集和处理的重要性对血浆中的缓激肽进行准确定量十分困难，因为缓激肽可以在采血和样品制备中经蛋白水解过程而生成1,6,7。本研究特别注重血液收集方案，通过添加蛋白酶抑制剂以防止体外缓激肽的形成。在图6中，A图和B图显示出，如果采用同一供体和相同的收集方案，将血液收集到分别添加和未添加蛋白酶抑制剂