在紫杉醇这种微管稳定剂存在时通过组装的方法分离微管

实验材料组织匀浆试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 对感兴趣的组织匀浆,每克组织加 1 ml PME 缓冲液。PME 缓冲液:0.1 mol/L PIPES,pH 6.92 mmol/L EGTA1 mmol/L MgSO41 mmol/L DTT ( 或 DTE)0.5 mmol/L GTP2. 匀浆物以 150000 g 离心 60 分钟。3. 小心地转移上清,避兔任何污染颗粒,它们可能来自于沉淀块或可能发现于沉淀块上方的松的小碎片聚集物。4. 测量上清的体积,调整紫杉醇浓度到 20 μmol/L。5. 在 37℃ 孵育 15~20 分钟。6. 于 37℃ 小心地在溶液下铺几毫升含 10% 蔗糖和 10 μmol/L 紫杉醇的 PME 缓冲液。7. 在 25℃ 以 45000 g 离心 30 分钟收集组装了的微管。8. 去掉上清,用温的 PME 缓冲液小心地冲洗离心管壁,小心不要打碎微管沉淀物。9. 用少......阅读全文

在紫杉醇这种微管稳定剂存在时通过组装的方法分离微管

实验材料组织匀浆试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 对感兴趣的组织匀浆,每克组织加 1 ml PME 缓冲液。PME 缓冲液:0.1 mol/L PIPES,pH 6.92 mmol/L EGTA1 mmol/L MgSO41 mmol/L DTT ( 或 DTE)0.5 mmo

从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤一、通过盐柚提从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白1. 得到沉降下来的经紫杉醇稳定了的微管。或者可以通过加紫杉醇到 20 μmol/L 来稳定用组装/解聚方法制备的微管。2. 于 37℃ 在微管中加 NaCl 使终浓度为 0.35 m

在含甘油的缓冲液中通过组装/解聚分离微管

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 拿到脑组织(小牛或奶牛),以每克组织 0.75 ml PME 的比例进行匀浆。2. 匀浆物在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟。3. 转移上清并用等体积 PME-G 稀释。上清在 37℃ 温育 30~40 分钟。4.

从用紫杉醇稳定的微管中分离基于微管的运动蛋白

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤一、分离驱动蛋白1. 以每克组织 1.5 ml PME 缓冲液的比例进行组织匀浆,匀浆物在 39000 g 离心 30 分钟。PME 缓冲液:0.1 mol/L PIPES,pH 6.92 mmol/L EGTA1 mmol/L MgS

通过组装/解聚从缺少组装驱动成分的缓冲液中分离微管

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 收集脑组织(几百克)(1) 如果从屠宰场取脑(猪)① 只要美国地方检察官允许,在宰杀后尽快收集脑(猪 )。② 把脑一个一个地放在薄塑料袋里,立即浸入冰水混合物中,运到实验室。③ 在冰库里,研究者带着橡胶手套取出脑、表面的血管、血凝

分离微管和微管相关蛋白实验

通过组装/解聚从缺少组装驱动成分的缓冲液中分离微管 在含甘油的缓冲液中通过组装/解聚分离微管 在紫杉醇这种微管稳定剂存在时通过组装的方法分离微管 从用紫杉醇稳定的微管中分离微管相关蛋白 通过ATP释放法从用紫杉醇稳定的微管中分离基于微管的运

Cell揭示抗癌药物紫杉醇作用机制

  来自加州大学伯克利分校的科学家们发现了处方药紫杉醇在细胞内的极微妙效应,正是这一效应使得它成为了世界上最广泛应用的抗癌药物之一(延伸阅读:两篇Nature论文同期揭示紫杉醇耐受之谜 )。  揭示出紫杉醇干扰细胞骨架组成部分——微管正常功能的一些细节,有可能帮助设计出更好的抗癌药物,或是改善紫杉醇

什么是微管?

微管 (microtubule)可在所有哺乳类 动物细胞中存在,直径大于12nm,除了红细胞 ( 红血球 )外,所有微管均由约55kD的α及β 微管蛋白 (tubulin)组成。它们 细胞骨架正常时以(αβ)二聚体形式存在,并以头尾相连的方式聚合,形成微管蛋白原纤维 (protofilament),

染色体的运动依赖纺锤体微管的组装和去组装

  当细胞从间期进入有丝分裂期,间期细胞微管网络解聚为游离的αβ-微管蛋白二聚体,再重组成纺锤体,介导染色体的运动;分裂末期纺锤体微管解聚,又重组形成细胞质微管网络。  可分为:动粒微管:连接染色体动粒于两极的微管。  极间微管:从两极发出,在纺锤体中部赤道区相互交错的微管。  星体微管:中心体周围

极微管的概念

中文名称极微管英文名称polar microtubule定  义由纺锤体两极发出的纺锤体微管。其游离端在赤道面处相互交叠或相互搭桥,不与动粒相连。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞周期与细胞分裂(二级学科)

研究揭示α微管蛋白亚型对微管形态的影响及机制

原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/2/494183.shtm中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)鲍岚组与上海高等研究院/广东省智能科学与技术研究院张旭组合作,在Journal of Molecular Cell Bi

抗微管药物实验

实验方法原理 微管蛋白溶液在0~4℃是无色透明溶液,当温度升高,或37℃保温时,管蛋白聚合生成微管,随之溶液的浊度增加,吸收度(OD)上升,这可用分光光度计,在 350 nm 波长测得,根据所测得的OD值对保温时间作图,绘出“S”型聚合曲线。相反,将已聚合的微管溶液放水浴。亦可以测定其解聚曲线。

抗微管药物实验

抗微管药物实验主要用于(1)寻找新抗癌药(2)研究抗癌药作用机制。实验方法原理微管蛋白溶液在0~4℃是无色透明溶液,当温度升高,或37℃保温时,管蛋白聚合生成微管,随之溶液的浊度增加,吸收度(OD)上升,这可用分光光度计,在 350 nm 波长测得,根据所测得的OD值对保温时间作图,绘出“S”型聚合

什么是微管蛋白?

  tubulin组成微管的蛋白质称为微管蛋白。微管蛋白是球形分子,有两种类型:α微管蛋白(α-tubulin)和β微管蛋白(β-tubulin),这两种微管蛋白约占微管蛋白总量的80%~95%,具有相似的三维结构,能够紧密地结合成二聚体,作为微管组装的亚基。α亚基由450个氨基酸组成,β亚基是由4

微管蛋白的功能特点

α-和β-微管蛋白聚合成动态微管,这些亚基是微酸性的,等电点在5.2和5.8之间。在真核生物中,微管是细胞骨架的主要成分之一,并且在许多过程中起作用,包括结构支持,细胞内转运和DNA分离。为了形成微管,α-和β-微管蛋白的二聚体与GTP结合并在GTP结合状态下组装到微管的(+)末端。β-微管蛋白亚基

微管蛋白的功能特点

α-和β-微管蛋白聚合成动态微管,这些亚基是微酸性的,等电点在5.2和5.8之间。在真核生物中,微管是细胞骨架的主要成分之一,并且在许多过程中起作用,包括结构支持,细胞内转运和DNA分离。为了形成微管,α-和β-微管蛋白的二聚体与GTP结合并在GTP结合状态下组装到微管的(+)末端。β-微管蛋白亚基

微管蛋白的结构特点

tubulin组成微管的蛋白质称为微管蛋白。微管蛋白是球形分子,有两种类型:α微管蛋白(α-tubulin)和β微管蛋白(β-tubulin),这两种微管蛋白约占微管蛋白总量的80%~95%,具有相似的三维结构,能够紧密地结合成二聚体,作为微管组装的亚基。α亚基由450个氨基酸组成,β亚基是由455

微管蛋白的功能应用

α-和β-微管蛋白聚合成动态微管,这些亚基是微酸性的,等电点在5.2和5.8之间。在真核生物中,微管是细胞骨架的主要成分之一,并且在许多过程中起作用,包括结构支持,细胞内转运和DNA分离。为了形成微管,α-和β-微管蛋白的二聚体与GTP结合并在GTP结合状态下组装到微管的(+)末端。β-微管蛋白亚基

动粒微管的概念

中文名称动粒微管英文名称kinetochore microtubule定  义在有丝分裂或减数分裂的纺锤体中,正端与染色体动粒相连的微管。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞周期与细胞分裂(二级学科)

微管蛋白的结构特点

是一种球蛋白,是细胞内微管的基本结构单位。它是由两个蛋白质分子,即α-、β-微管蛋白分子聚合而成的异二聚体;每个这样的二聚体又与两个核苷酸分子相结合,一个属紧密结合,另一个为疏松结合,而且可以快速交换。分子量12万,沉降系数6s。微管蛋白有两个尺寸相等而结构不同的亚基(α和β)。其亚基分子量为5.5

β微管蛋白的相关介绍

  已知与人微管蛋白结合的所有药物都与β-微管蛋白结合。这些包括紫杉醇,秋水仙碱和长春花生物碱,它们各自在β-微管蛋白上具有不同的结合位点。  III类β微管蛋白是微管元件中只表示神经元,并且是特定于神经组织神经元流行标识符。它比其他同种型的β-微管蛋白更慢地结合秋水仙碱。  β1-微管蛋白,有时称

概述紫杉醇的作用机制

  1979年,美国爱因斯坦医学院的分子药理学家Horwitz博士阐明了紫杉醇独特的抗肿瘤作用机制:紫杉醇可使微管蛋白和组成微管的微管蛋白二聚体失去动态平衡,诱导与促进微管蛋白聚合、微管装配、防止解聚,从而使微管稳定并抑制癌细胞的有丝分裂和触发细胞凋亡,进而有效阻止癌细胞的增殖,起到抗癌作用。事实上

Cell:微管结构助力抗癌药物开发

  微管是直径仅有几纳米的微管蛋白的空心纤维,其可以形成活细胞的骨架并且在细胞分裂的过程中扮演着重要的角色;近日,刊登在Cell上的一篇报告中,来自加利福尼亚大学等处的研究者通过联合研究,将冷冻电镜技术同特殊的成像分析方法进行结合,成功地从原子视野对微管进行了观察,这对于理解微管在末端结合蛋白中的功

Science:重大进展!揭示纤毛二联微管组装机制

  我们的大部分细胞都含有不能移动的初级纤毛(primary cilium),即一类用于传递来自周围环境的信息的天线。一些细胞还具有许多用于产生运动的移动性纤毛。纤毛的“骨架”由二联微管(microtubule doublet)组成。纤毛在组装或功能上的缺陷可引起称为纤毛病(ciliopathy)的

微管反应器原理

微化工系统是以带有微结构元件的化工装备为核心的化工系统,它的突出特点是在微时空尺度上控制流动、传递和反应过程,为实现高效、安全的物质转化提供了基础。微化工系统相关研究起源于20世纪90年代[1],多年来的研究结果表明:微化工设备内流动状态高度可控,液滴和气泡的分散尺度一般在数微米至数百微米之间;具有

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验1

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性 实验材料 微管 试剂、试剂盒 聚赖氨酸溶液 仪器、耗材 盖玻片 实验步骤 1. 准备该显微检测所需的盖玻片: (1) 盖玻片在 200 μg/ml 聚赖氨酸溶液中室温过夜。 (2) 玻片在盛

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 在一个培养皿里堆一些潮湿的滤纸片,放一块盖玻片到上面。加 50 μl 含运动蛋白的溶液到盖玻片的表面并涂开。盖上盖子在室温放 5~10 分钟,使蛋白黏附在玻璃上。2. 转移盖玻片,用室温的含

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性 通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性             实验材料 微管

对基于微管的运动蛋白进行性质鉴定实验

通过乳胶珠沿微管的移动来观察基于微管的运动蛋白活性通过微管滑行来观察基于微管的运动蛋白活性实验材料微管                                                          试剂、试剂盒聚赖氨酸溶液                            

微管滑动机制的定义

中文名称微管滑动机制英文名称sliding microtubule mechanism定  义主张真核细胞纤毛的摆动是由于轴丝中相邻外周二联丝微管间相互滑动引起。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生理(二级学科)