小鼠巨噬细胞的分离
实验步骤基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细胞用）7 0 % 乙醇收集用培养基：含 5 % (v/V ) FBS (Hyclone，无内毒素）的 D M E M (G I B C O /B R L )Diff-Quik 染液 I、 II 和 III (Baxter)25 G 针头6m l 和 30m l 注射器镊 子 和平头外科剪（浸 于 7 0 % 乙醇中）19 G 针头50m l 聚丙烯锥底塑料离心管，冰上预冷离 心 机（Shandon/Lipshaw)细 胞 甩 片 机（Shandon/Lipshaw)Sorvall R T 6000 离 心 机 及 H l O O O ......阅读全文
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－分－离
实验步骤基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－表－型－检－测
实验步骤基 本 方 案 直 标 法 检 测 小 鼠 巨 噬 细 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 离心机I . 准 备 4 只 12m m X 75m m 试管，将试管编号为 1〜4。每 管 中 加 入 2 X IO7个细胞/ml细胞悬液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
巨－噬－细－胞－一－氧－化－氮－的－检－测
实验步骤基本方案材料展开
巨－噬－细－胞－抗－肿－瘤－活－性－的－检－测
实验步骤基本方案 [111In] 释放法检测巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用材 料辅助方案 [111In ] 标记肿瘤靶细胞材 料展开
巨－噬－细－胞－吞－噬－功－能－和－杀－伤－功－能－的－检－测
实验步骤基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核
人－NK－T－细－胞－的－分－离－和－扩－增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
磁－珠－法－分－离T－细－胞－和－B－细胞
实验步骤基 本 方 案 1 用 AUTOMACS 系 统 进行 总 T 细胞、 CD4 +细 胞 或 CD8+T细胞的自动分离材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液基 本 方 案 2 使 用 AUTOMACS 系 统 进 行 B 细胞的自动分选材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液MACS 缓冲液CD45R (B2
P－C－R－检－测－小－鼠－T－细－胞－受－体－表－达
实验步骤 基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表达材 料正常小鼠的组织匀浆或者是 H B S S 制备的单个细胞悬液（IO4〜IO7) (附 录 1)无菌水展开
小鼠巨噬细胞的分离
基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细胞用）7
ELISPOT方－法－检－测－分－泌－细－胞－因－子－的－细－胞
实验步骤基本方案材 料包被缓冲液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻断缓冲液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培养基（或其他适宜培养基）分泌细胞因子的细胞（小鼠或人的）丝裂原，抗原或其他促细胞因子分泌的刺激物带有标记物的
B－细－胞－分－泌－抗－体－的－检－测
实验步骤基 本 方案材 料外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培养基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 养 板（Costar)1 . 计 数 PBMC (附录 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培养基调整浓度至 4 X 10
细－胞－毒－性－T－淋－巴－细－胞－的－诱－导－及－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 从 C TL 前体中诱导细胞毒性注意：反应细胞应根据抗原的种类选择是否需要进行体内致敏。材 料反应细胞来源：未致敏的或者体内致敏的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 1 和 2致敏培养基刺激细胞来源：未修饰或半抗原修饰的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 3)R P M I -1 0 完全培
流－式－细－胞－仪－检－测－全－血－的－人－淋－巴－细－胞
实验步骤基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉
干细胞的鉴定实验——流－式－细－胞－仪－检－测－分－析－技－术
实验步骤流 式 细 胞 仪 检 测 分 析 技 术实 验 材 料(1) 不同来源的干细胞，细胞数不少于 5xl0 5 个/管。(2) 荧光标记的抗体或抗体及荧光二抗。(3)PBS。实 验 步 骤(1) 将 细 胞 用 PBS 充分洗涤后重悬于 5000 PBS 中，如果细胞收集和鉴定不能同天完成，可
染－性－疾－病－动－物－模－型——巨细胞病毒感染小鼠模型的建立
实验步骤 基 本 方 案 巨 细 胞 病 毒 感 染 小 鼠 模 型材 料B A B L /c 小 鼠（新生或成鼠）或其他品系纯化的鼠巨细胞病毒（m C M V ; 见辅助方案 1 ) 或 唾 液 腺 病 毒（S G V ，见辅助方案2 )完全培养基钢 网（0 •45m m )Ia.感染新生小鼠：用
T－细－胞－克－隆－的－建－立
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
人单核/－巨噬细胞的表型检测
基本方案材料待 测 单 个 核 细 胞（肝素抗凝血或肝素抗凝骨髓）或 外 周 血 单 个 核 细 胞（单 元 8.1)或者单核/巨 噬 细 胞（单 元 8. 5 , 推荐采用阴性分选）PBSPBS/肝素：含 0.1% (V/V ) 肝 素 的 PBS阻 断 IgG，浓 度 3 mg/ml (如正常小
人单核/－巨噬细胞的表型检测
实验步骤基本方案材料待 测 单 个 核 细 胞（肝素抗凝血或肝素抗凝骨髓）或 外 周 血 单 个 核 细 胞（单 元 8.1)或者单核/巨 噬 细 胞（单 元 8. 5 , 推荐采用阴性分选）PBSPBS/肝素：含 0.1% (V/V ) 肝 素 的 PBS阻 断 IgG，浓 度 3 mg/ml (
胞质小RNA的概念
中文名称胞质小RNA英文名称small cytoplasmic RNA;scRNA定 义细胞质中的小分子RNA。通常指转移核糖核酸(tRNA)和小的核糖体RNA(rRNA)，如5S rRNA、5.8S rRNA等。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
淋－巴－细－胞－活－化－过－程－中－肌－醇－磷－脂－周－转－的－分－析
实验步骤 基 本 方 案 1 通 过 道 威 克 斯（DOWEX) 离 子 交 换 层 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸 材料 备 选 方 案 通 过 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸 附加材料 [3 H ] InsP 样 本（见基本方案，步 骤 6) 和标准
HIV的检测与分析_在单核细胞和巨噬细胞中培养－HIV
实验步骤基 本 方 案 单 核 细 胞 来 源 的 巨 噬 细 胞 培 养 和 H IV 感染药物或生长因子的加入时间依试剂及实验方案而定，单核细胞通常在分离的当天加入 ，成熟的单核细胞来源的巨卩蜜细胞（monocyte-derived macrophages， M D M ) 则在H I V 感染
流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因子细胞
实验步骤基本方案细胞因子分泌实验材 料冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基抗原， 1〜10ug/m l 肽 或 1〜100ug/m l 蛋
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离
实验步骤基本方案细胞因子分泌实验材 料冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基抗原， 1〜10ug/m l 肽 或 1〜100ug/m l 蛋
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验——细－胞－培－养－基－成－分
实验步骤2.2.5 BRL-条件培养基B R L 细胞在大鼠肝细胞培养基（BRL-CM) 中生长至汇合，用新鲜培养基更换一次 ， 3 天后收集这些培养基。所有培养基用无菌的、孔 径 0.2um 的 P E S 滤膜过滤，特别是来自其他细胞类型的条件培养基。应该注意的是：在细胞分化研究中可能被用到的生
分广离广峰太弱问题
a.离于源的温度、电流过高(超过裂解温度和电离电流)；排除方法：调整离子源温度、电流。b. 化学电离气压过高或过低(对于化学电离源)；排除方法：调整化学电离气压。
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因...
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离 分泌细胞因子的细胞基本方案细胞因子分泌实验材 料冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基抗原， 1〜10
抗原呈递细胞的选择和制备（一）
基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（见 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V ) 台
抗原呈递细胞的选择和制备
实验步骤基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（见 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V
BrdU－检－测－丁－细－胞－和－B－细胞增殖
实验步骤基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液（口 服用）或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液（注射用)P B S ， p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
巨噬细胞吞噬功能和杀伤功能的检测
基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核细胞增多