WIKI资讯
WIKI资讯
放射性标记的寡核苷酸用于酶促反应如引物延伸反应时，需要完全除去未掺入的放射性标记物。本方案介绍的是利用大小排阻层析时寡核苷酸与单核苷酸移动速率差异，分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒氯仿EDTA乙醇酚：氯仿乙酸钠TETris-ClTris-SDS层析缓冲液放射性标记的寡核苷酸纯化的原料仪器、耗材凝胶过滤树脂破璃棉巴斯德吸管实验步骤材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。氯仿任选，见步驟 7。EDTA(0.5mol/L,pH8.0)乙醇酚：氯仿任选，见步骤 7。乙酸钠（3mol/L,pH5.2）任选，见步驟 7。TE(pH7.6)Tris-Cl(1mol/L pH8.0)任选，见步骤 7。Tris-SDS 层析缓冲液10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)0.1%(m/V)SDS核酸和寡核苷酸放射性标记的寡核苷酸纯化的原料为方案 2(步......阅读全文
以下介绍的是标记 10pmol 高比活度的寡核苷酸的反应，标记不同量的寡核苷酸可以通过增加或减少反应体积而保持各组分的相应浓度来实现。也可用类似的反应条件，将非放射性的磷酸加到用于定点突变的合成寡核苷酸 5'末端。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒T4噬菌
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 Tris-Cl T4噬菌体多核苷酸激酶 寡核苷酸 [γ-
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-ClT4噬菌体多核苷酸激酶寡核苷酸[γ-32P]ATP仪器、耗材 微量离心管水浴箱实验步骤 材料缓冲液与溶液稀释贮存液至适当浓度10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-Cl(1mol/L,pH8.0)酶和缓冲液T4噬菌体多核苷酸激酶野生型T4噬
连接反应的策略 可以采用几种策略来进行外源ＤＮＡ片段和质粒载体的连接。对此，可依据外源ＤＮＡ片段未的性质，以及质粒载体与外源ＤＮＡ上限制酸切位点的性质来作出选择。（一）外源ＤＮＡ片段未的性质带有各种未的外源ＤＮＡ的克隆方法见下表：──────────────────────
１．带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段，刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样，因而几乎总是能找到一种带有与外ＤＮＡ片段未匹配的限制切位点的载体。于是，采用所谓的定向
1 分离方法 采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白
摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法，主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。 多肽类化合物广泛存在于自然界中，其中对具有一定生物活性的多肽的研究，一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体