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蛋白质与多肽激素的放射免疫分析2

(二)乳过氧化物酶法(LPO) 本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。 1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2.方法以标记蛋白质抗原为例。 (1)反应液组成:蛋白质2~5μg溶于磷酸缓冲液10~25μl中,加入Na125i 1m Ci(10μl)、乳过氧化物酶溶液25ng(10μl)、H2O2200ng(10μl); (2)在室温保温7min; (3)加入H2O2200ng(10μl); (4)过7min再加入H2O2(3μl); (5)保温7min后,加入0.5ml、10mmol/L巯基乙醇以停止反应; (6)10min后加入NaI载体溶液1ml ; (7)按常规方法分离纯化。 3.注意事项 (1)LPO质量好坏,可直接影响标记......阅读全文

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析第一节 概述  1960年,美国学者Yalow 和Berson 创立了放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA),并首先用于糖尿病人血浆中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破,开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法

放射性碘标记

在RIA中,标记抗原质量的优劣,直接影响测定结果,必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原,并保持免疫活性不受丧失。  一、同位素的选择  同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量,这种测量较灵敏而方便,故多用放射性同位素。标记抗原,常用的放射性同位素有3H、14C、1

酶免疫分析技术进展与自动化

郝繁运   综述 中国误诊学杂志  2007年 第一期  第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编 摘要:本文主要介绍了酶免疫分析的发展现状,从酶免疫分析标记技术若干环节的技术进步、在方法学上与现代化技术的融合与发展、酶免疫分析技

放射免疫分析法的建立

 一、放射免疫分析的基本试剂  (一)标准品  标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。  按实

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-3

 (四)磁性分离法  1975年,Hersh报道了用磁化分离技术分离血清狄高辛放免测定的B、F后,受到了广泛的重视。近年来国内外许多学者对磁化颗粒的制备进行了系统地研究,应用于B与F的分离,并取得了引人注目的进展,使放免的B、F分离不再使用离心,缩短了放免操作时间,便于放免自动化测量。磁性分离的具体

肿瘤标志物 7 种检测方法大比拼

  肿瘤具有高死亡率、高转移率和高复发率,是危害人类健康的重大疾病。诊断肿瘤的传统方法有病理组织活检、核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、电子计算机断层扫描(computed tomography,CT)、B 超、X 线胸片、内镜检查等。这些检查对于肿瘤早期

肿瘤标志物 7 种检测方法大比拼

  肿瘤具有高死亡率、高转移率和高复发率,是危害人类健康的重大疾病。诊断肿瘤的传统方法有病理组织活检、核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)、电子计算机断层扫描(computed tomography,CT)、B 超、X 线胸片、内镜检查等。这些检查对于肿瘤早期

放射免疫分析法的建立-1

一、放射免疫分析的基本试剂(一)标准品标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。按实验要求,将标准

CA19-9在两种不同型号化学发光仪上检测结果的探讨

作者:汪 欣,赵素萍    作者单位:350003 福建福州,福建省第二人民医院检验科【摘要】  目的 探讨美国雅培公司的AXSYM全自动免疫分析仪和i2000型全自动免疫分析仪及其配套试剂检测血清CA19-9结果的差异。方法 AXSYM全自动免疫分

肿瘤标志物分类、检测原理和检测方法

 根据WHO资料,全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因,占总死亡人数的22%,并逐年增加。10种常见肿瘤:胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌为例,肿瘤直径<

肿瘤标志物分类、检测原理和检测方法

     根据WHO资料,全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因,占总死亡人数的22%,并逐年增加。      10种常见肿瘤:胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。以肝癌

体液学检查进展

随着基础医学深入研究,高新科技检测技术在检验医学的广泛应用,使国内血液各项检查项目水平明显提高,但相比之下,先进的技术及方法在体液学常规检查中应用较少,为了提高我国体液学检测水平,现将近年来国内外进展综述如下。  一、尿液沉渣检查及尿液蛋白分析  1.尿沉渣检验方法学进展主要是显微镜检查的标准化和沉

组织学研究方法

(一)一般光学显微镜术应用一般光学显微镜(简称光镜)观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块,先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的蛋白质迅速凝固,防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等,一般常将几种固定剂配制成混

放射性同位素的应用-同位素示踪法(三)

(二)正式实验阶段 1.选择放射性同位素的剂量   同位素必须能经得起稀释,使其最后样品的放射性不能低于本底,一般来说放射性同位素在生物体内不是完全均匀地被稀释,可能在某些器官、组织、细胞、某些分子中有选择性地蓄积,蓄积的部分放射性就会很强,在这种情况下,应以相关部位对示踪剂的蓄积率来考虑示踪剂用量

磁纳米探针检测人绒毛膜促性腺激素

【摘要】  采用链霉亲和素包被磁纳米粒子,将生物素标记的特异性抗体偶联在磁纳米粒子上,制备出高特异性的磁纳米探针;利用此探针对人绒毛膜促性腺激素(HCG)进行测定,建立了定量检测蛋白类激素的化学发光分析方法。利用紫外可见分光光度计、透射电镜及动态检验地带网光散射仪对磁纳米探针进行表征,同时

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)-3

思考题 1. 酶联免疫吸附实验的基本原理是什么?常用方法有那些?   2. 间接法和直接法相比各有什么优缺点?   放射免疫测定法—— 125 I 标记技术 放射免疫测定 (radioimmunoassay, RIA) 是将同位分析的高灵敏度与抗原抗体

当质谱技术应用于医学检验

  质谱技术 (mass spectrometry) 是分离和检测带电粒子质荷比的分析技术。随着离子源及质量分析器技术的变革、质谱仪器设计的快速改进等,质谱技术已成为化学分析领域和生命科学领域非常有效的分析工具,尤其在医学检验中的应用越来越为广泛和深入。  由于质谱技术的高特异性、高灵敏度、单次分析

当质谱技术应用于医学检验……

  质谱技术 (mass spectrometry) 是分离和检测带电粒子质荷比的分析技术。随着离子源及质量分析器技术的变革、质谱仪器设计的快速改进等,质谱技术已成为化学分析领域和生命科学领域非常有效的分析工具,尤其在医学检验中的应用越来越为广泛和深入。  由于质谱技术的高特异性、高灵敏度、单次分析

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时间分辨荧光免疫技术

第一部份:时间分辨的原理、我国乙肝两对半的流行情况及时间分辨在乙肝两 对半上 的应用技术 一、时间分辨荧光分析( Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA )的基本原理。   TRFIA 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物,如 铕 ( Eu3+ )

时间分辨荧光免疫技术

第一部份:时间分辨的原理、我国乙肝两对半的流行情况及时间分辨在乙肝两 对半上 的应用技术一、时间分辨荧光分析( Time-resolved Fluorescence Immunoassay TRFIA )的基本原理。  TRFIA 是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物,如 铕 ( Eu3+ )、 铽

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——检测

实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大