多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一,并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的K. Mullis因此贡献而获得了1993年度诺贝尔化学奖。 一、PCR技术的工作原理 PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5'末端和3'末端互补的寡核苷酸片段为引物(primer),在耐热DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA分子合成。重复这一过程,即可使目的DNA片段得以大量扩增。 组成PCR反应体系的基本成分包括:模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚......阅读全文

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

PCR-(多聚酶链反应)

【实验目的】掌握PCR技术的原理,学习PCR技术的基本方法,了解PCR技术的应用范围与意义。【实验原理】详见14章第2节。【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】引物(primer),根据需扩增的DNA设计相应的引物;TagDNA聚合酶; 10×PCR缓冲液(随酶一起购买);5mmol/L dN

免疫多聚酶链反应

实验概要免疫多聚酶链反应(PCR)是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。由于PCR具有强大的扩增能力,因而比常规的免疫学检测法,如ELISA和放射免疫测定(RIA)的敏感性提高好几个数量级。实验原理免疫PC

多聚酶链式反应PCR

多聚酶链式反应PCR :(1)PCR原理:在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。以欲扩增的DNA做为模板,以和模板正链和负链末端互补的两种寡聚核苷酸做为引物,经过模板DNA变性、模板引物复性结合、并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模

dna多聚酶的注意事项

  (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2) 可作为乙肝病毒复制及有传染性的标志。

dna多聚酶的临床意义

  (1) 升高:乙肝病毒持续感染者、急性乙型肝炎潜伏期、初期、繁殖期、乙型慢性肝炎、乙型慢性肝炎的e抗体阳性、DNA多聚酶高值时说明肝功能恶化。(2) 降低:乙型慢性肝炎的e抗原阳性者。

多聚酶链式反应的原理

  多聚酶 链式反应的原理类似于DNA的天然 复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡 核苷酸 引物,经 变性、退火和延伸若干个 循环后,DNA扩增2n倍。  1.变性:加热使模板DNA在 高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。  2.退火:使溶液温度降至

生化检测项目DNA多聚酶介绍

DNA多聚酶介绍:       基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。DNA多聚酶正常值:       25cpm。DNA多

几种多聚螯合物酶法

实验概要本文介绍了三种多聚螯合物酶法:PowerVision法,ELPS法和EPOS法。实验原理1.  PowerVision系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,

几种多聚螯合物酶法

实验概要本文介绍了三种多聚螯合物酶法:PowerVision法,ELPS法和EPOS法。实验原理1.  PowerVision系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚螯合物酶组化实验

实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架,将特异性抗体和 HRP 结合在一起,形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物,该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时,只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂,孵育 30~60 min 即可完成。勿需再加

多聚螯合物酶组化实验

EPOS 法 EnVision 法 UIP 法 PowerVision 法             实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

  多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。  PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(2)

(2)反应增强剂:PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%~10%二甲基亚砜(DMSO)、5%~20%甘油、非离子去污剂、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量,有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。(3)热启动PCR:如果PCR反应混合物置于低于Tm

临床化学检查方法介绍DNA多聚酶介绍

DNA多聚酶介绍:       基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。DNA多聚酶正常值:       25cpm。DNA多

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(1)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应

乙型肝炎病毒——血清DNA多聚酶检测

  测定HBV特异的DNA聚合酶活性是反映HBV增殖的一个有用指标。HBVDNA聚合酶活性与HBsAg滴度及HBeAn阳性有关,一般说HBeAg阳性,Dane颗粒增殖多,DNA聚合酶活性也高。HBVDNA聚合酶常存在于Dane颗粒核心内,但30%-50%HBV感染者的血清内还有可溶性游离HBVDNA

dna多聚酶的注意事项及相关疾病

  注意事项  (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2) 可作为乙肝病毒复制及有传染性的标志。  相关疾病  慢性迁延性肝炎

多聚螯合物酶组化实验——UIP-法

实验方法原理UIP(universal immuno-enzyme polymer)法,即通用免疫酶复合物法,是 Nichirei 发明的一种新型免疫组化染色方法。其基本原理及工作流程与 EnVision 法相似,不同的是 UIP 复合物为 HRF 氨基酸-抗鼠或抗兔 IgG 复合物(N-Histo

多聚螯合物酶组化实验——EPOS-法

长期以来,许多的研究者希望 IHC 方法更敏感、更稳定、更简单,要求多步检测系统简化,但敏感性要进一步提高,使这一技术面临巨大的挑战。在实践中,往往是步骤减少了,敏感性也降低,这是一对矛盾。一种新的多聚螯合物酶二步法在 1995 年被隆重推出,该方法与简单的二步法相比较,具有很高的敏感性、稳定性和特

多聚螯合物酶组化实验——EnVision-法

实验方法原理抗原-抗体反应结合后,第二抗体上标记有多聚化合物(葡聚糖)酶复合物(EnVision 复合物),与第一抗体结合,进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision 复合物是利用一种多聚化合物将 HRP 或 AKP 和第二抗体(抗鼠或抗兔 IgG)同时标记在一个多聚化合物上,即形成酶-多聚化合

多聚螯合物酶组化实验——PowerVision-法

实验方法原理PowerVision 系统的原理是连接抗体上紧密地连接上许许多多的酶分子,呈串珠状排列,由于利用了一种小的呈线性或很小枝状多功能试剂作为骨架分子,与酶和免疫球蛋白交联,排列紧密,形成串珠状多聚物,因此相对分子质量较小。其特点是简便、敏感。其操作流程同 EnVision 法,但一抗的稀释

dna多聚酶的临床意义及注意事项

  临床意义  (1) 升高:乙肝病毒持续感染者、急性乙型肝炎潜伏期、初期、繁殖期、乙型慢性肝炎、乙型慢性肝炎的e抗体阳性、DNA多聚酶高值时说明肝功能恶化。(2) 降低:乙型慢性肝炎的e抗原阳性者。  注意事项  (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2)

多聚体的概念

多聚体是由单体(monomers)结合而成的分子。生物分子(如蛋白质、核酸、糖)都是多聚体(polymers)。

多聚磷酸的制备

工业上多磷酸的制备是通过磷酸高温聚合脱水(500℃以上)制得。控制酸流和热气流可得到不同含量的多磷酸(100%、105%、115%、117%甚至更高)。因为热法的磷酸杂质含量更少,所以用热法磷酸聚合的多磷酸品质更好。

生物多聚体的概念

中文名称生物多聚体英文名称biopolymer定  义由分子量较低的基本结构单元首尾相连形成的多聚化合物。如氨基酸组成的蛋白质和核苷酸组成的核酸等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)

生物多聚体的定义

中文名称生物多聚体英文名称biopolymer定  义由分子量较低的基本结构单元首尾相连形成的多聚化合物。如氨基酸组成的蛋白质和核苷酸组成的核酸等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)

简述多聚磷酸的应用

  在有机合成中用作失水剂、环化剂、酰化剂,是缩合、环化、重排、取代等反应的催化剂或溶剂。有时用多聚磷酸酯(PPE)类以增加多聚磷酸在有机溶剂中的溶解度。此外多聚磷酸也用作正磷酸的代用品及分析试剂。