原代肺泡上皮细胞的体外分离培养

1、完全无血液残留肺脏组织:2、消化肺组织:常用细胞消化酶:胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。经支气管将酶灌注到完整的肺中消化,或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。3、分离纯化细胞:原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法:(1)密度梯度离心法:密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同,在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。 用ficoll或percoll不连续梯度离心法分离肺泡Ⅱ型上皮细胞。(2)滤膜分离法:肺泡Ⅱ型上皮细胞约10mm,比巨噬细胞(约25mm)和Ⅰ型细胞 (50mm-100mm)小,用150mm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片,30mm-40mm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型细胞和部分巨噬细胞,采用 15mm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单,它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。(3)流式细胞技术法:根据不同细胞之间的荧光差异,用荧光物质标记筛选。肺泡上皮细胞内含有丰富的脂类物质,用亲脂性荧光素标......阅读全文

原代肺泡上皮细胞的体外分离培养

1、完全无血液残留肺脏组织:2、消化肺组织:常用细胞消化酶:胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。经支气管将酶灌注到完整的肺中消化,或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。3、分离纯化细胞:原代肺泡上皮细胞的分离纯化主要方法:(1)密度梯度离心法:密度梯度离心分离细胞的原理是不同细胞的沉降系数不同

肺泡上皮细胞的分离步骤

一、取得完全无血液残留的肺脏:实验前j将大鼠全身血液放净,取得完全无血液残留的肺脏二、消化肺组织:常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶,现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定,有效作用时间短暂,容易自我降解等问题。D

原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化

 原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化  PriCells-原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化  原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有上皮样细胞又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等。混杂的细胞会直接影响实验结果。  在体外培养原代细胞时,为了保

原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化

PriCells-原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有上皮样细胞又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等。混杂的细胞会直接影响实验结果。在体外培养原代细胞时,为了保证实验结果的可靠性、一致性、稳定性、和可重复性,要求采用

原代微血管内皮细胞的体外分离培养

微血管内皮细胞生长因子的应用和免疫磁珠技术的发展,使微血管内皮细胞的培养和纯化变得相对简化。 1、微血管内皮细胞培养简述人体主要器官和组织的微血管内皮细胞已经培养成功的有:骨骼肌、心、脑、胃、视网膜、肺、皮肤、脉络膜、小肠、脂肪、肝窦、肾、关节滑膜、胎盘、骨髓、胰岛、角膜及食道等器官组织的微血管内皮

肺泡上皮细胞的分离方法步骤

1、取得完全无血液残留的肺脏:实验前将大鼠全身血液放净,取得完全无血液残留的肺脏。2、消化肺组织:常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶,现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定,有效作用时间短暂,容易自我降解等问题。D

原代细胞体外培养现状

  原代细胞自然生长有两种方式,锚定依赖或非锚定依赖,这主要取决于它们在体内的组织来源:外周血(非锚定依赖)或固体组织器官(锚定依赖)。原代细胞一旦分离后,24-48h内需要进行贴壁或起始,开始培养。  广义地说,所有的哺乳动物细胞,无论其类型或来源,都需要在与人类生理条件(即37°C,5%CO2)

原代肾上皮细胞培养实验

            实验方法原理 将自皮质切除的组织快切成碎块,冲洗后放入胶原蛋白酶和胰蛋白酶混合液,摇晃消化。定时用吸管研磨组织块,然后收集分离的细胞。用一定孔径大小的滤网过滤细胞悬液,除去未消化的组织块。然后,洗细胞,清除消化酶。用添加血清的培养液混悬细胞,

原代肾上皮细胞培养实验

原代肾上皮细胞培养实验             实验方法原理 将自皮质切除的组织快切成碎块,冲洗后放入胶原蛋白酶和胰蛋白酶混合液,摇晃消化。定时用吸管研磨组织块,然后收集分离的细胞。

原代肾上皮细胞培养实验

实验方法原理将自皮质切除的组织快切成碎块,冲洗后放入胶原蛋白酶和胰蛋白酶混合液,摇晃消化。定时用吸管研磨组织块,然后收集分离的细胞。用一定孔径大小的滤网过滤细胞悬液,除去未消化的组织块。然后,洗细胞,清除消化酶。用添加血清的培养液混悬细胞,将细胞接种于塑料培养器皿。实验材料肾组织片试剂、试剂盒DME

原代细胞分离与培养

对于大部分科研人员来说,研究中一般用到均是现成的细胞系/株,我们只需要:进行细胞传代和保种。然而,这些细胞系常常由于体外长期培养,而丢失原有生物学特性,对药物处理的反应差距越来越大。因此,原代细胞的地位日渐凸显,Paper中若有了原代细胞的数据都会添色不少。然而,就小编亲生经历,原代细胞分离着实是个

体外培养的原代细胞是如何进行培养的

体外培养的原代细胞是如何进行培养的,如果我们在进行体外培养,则就是一个原代细胞划细胞植株要要体外进行一个持续性的培养,则就是必须进行传代。这样方便于获得稳定的细胞植株或是大量的同种细胞,同时还可以维持细胞的种类的一个延续,传代培养的累计次数则就是细胞的代数。同时对于不同的动物与人的正常细胞在体外培养

日本从人类iPS细胞中分离肺泡上皮细胞

  据2014年8月22日《日刊工业新闻》报道,日本京都大学大学院医学研究科三岛理晃教授的研究小组与京都大学iPS细胞研究所的长船健二副教授、京都大学的小川诚司教授等共同从人类iPS细胞(人工多能性干细胞)中成功分离出肺泡上皮细胞。这一研究成果对于肺的再生研究、呼吸器官疑难病症的治疗以及相关新药研发

大鼠原代细胞分离与培养

  一、大鼠神经元细胞(酶消化法)   简述:新生24h或E18胎鼠,取脑,剥离海马,剪碎,木瓜酶消化,清洗过筛后铺于多聚赖氨酸包被的培养板中。   二、大鼠雪旺细胞(植块法)   简述:新生24h大鼠,取坐骨神经,剥去外膜和束膜,剪成1mm3的小块,均匀铺于培养皿内,加少量血清,37℃ C

原代软骨细胞分离培养

1、一般根据实验要求,选取不同年龄组的兔子,实际上兔子的年龄越小越好,毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力,耳静脉空气注射法处死后,无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨,剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜,放入盛有PBS液的培养皿中。2、将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块,移入25cm

正常视网膜色素上皮细胞原代培养

实验材料:1.    材料来源:人眼、兔眼或者猪眼等;2.    清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;3.    特殊取材器械:眼球托与7-0尼龙线。以灭菌的白色橡胶反口胶塞作为眼球托;4.    消毒液:200IU/ml的庆大

正常晶状体上皮细胞原代培养

实验材料:1. 材料来源:人眼、兔眼或者猪眼等;2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;3. 器械:无齿显微小镊子2把、培养板和培养皿若干;4. 培养液:为含15%胎牛血清的DMEM培养液;实验方法:1. 取材1)摘取动物或人的供体

胰腺上皮细胞分离及培养实验

实验方法原理从豚鼠胰腺组织分离细胞,用纱布或尼龙网过滤细胞悬液,将过滤的细胞悬液轻轻加于 BSA 液上面。通过 3 次连续离心和混悬细胞,使呈团状的细胞分散。然后,将细胞接种于涂有胶原蛋白的培养器皿。试剂、试剂盒F12K 组织培养液含有 20% 小牛血清HBSSHBSS-DVC葡萄糖胰蛋白酶液胰蛋白

牛角质上皮细胞的分离和培养

1) 用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼,水漂洗,再用 70% 乙醇简单处理一下。2)用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织(最好选取枝状角膜边缘组织)。3)将上述组织置于干燥的聚赖氨酸包被的表面,让其黏附全少 10 分钟。4) 加入培养液(MEM, 含 10%FCS,

牛角质上皮细胞的分离和培养

实验步骤1) 用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼,水漂洗,再用 70% 乙醇简单处理一下。2)用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织(最好选取枝状角膜边缘组织)。3)将上述组织置于干燥的聚赖氨酸包被的表面,让其黏附全少 10 分钟。4) 加入培养液(MEM, 含 10%

牛角质上皮细胞的分离和培养

实验步骤                                                         1) 用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼,水漂洗,再用 70% 乙醇简单处理一下。2)用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织(最好选取枝状

原代细胞分离与培养方法介绍

  前言   凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养,是建立细胞系的第一步,是一项基本技术。   原代细胞最接近和最能反映体内生长特性,适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。

体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏

一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基本原

体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏

一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基

体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏

一、实验原理细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养, 即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。细胞冻存及复苏的基

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

原代细胞培养可应用于:(1)分子生物学;(2)细胞生物学;(3)遗传学;(4)免疫学;(5)肿瘤学;(6)病毒学等领域。实验方法原理原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物体内取出所需的组织(或器官),经胰酶消化,

原代细胞分离和培养基本步骤

 1、器官和组织的选择    尽可能的去除不必要的组织和血迹。    2、原代细胞的分离    (1)应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。    (2)根据组织来源不同,可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。    3、原代细胞的培养:    (1)PriCells原代

原代细胞分离和培养基本步骤

原代细胞分离和培养基本步骤 1、器官和组织的选择尽可能的去除不必要的组织和血迹。 2、原代细胞的分离(1)应用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。(2)根据组织来源不同,可选用不同的PriCells原代细胞分离试剂盒。 3、原代细胞的培养:(1)PriCells原代细胞特制培养基(2

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物

原代细胞培养小鼠胚胎分离实验

鼠胚原代细胞培养             实验方法原理 原代细胞培养,是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官,在体外培养,直到第一次传代为止。这种培养,首先用无菌操作的方法,从动物