酵母细胞的培养与观察操作指南
一、实验目的1.掌握酵母细胞的培养 方法2.学会使用相差和微分干涉显微镜二、异源互补技术概述酿酒(芽殖)酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌 株在复合液体培养基中的倍增时间为90～120min，到静止期时细胞滴度为3×108到5×108细胞/mL。单个细胞在复合固体培养基上经过36 hr可长成1～2mm的单菌落，在合成的有限培养基中生长较慢，倍增时间至少增加为原来的两倍，且细胞的最终滴度仅达到2×107到3×107细胞/mL。在有限培养基平板上菌落需大约60 hr才能长成容易计数的大小。在复合或有限培养基上生长的菌落能影印培养或转移到膜上，进行分子水平的分析。非洲粟酒裂殖酵母和其近亲酿酒酵母一样，是一种子囊真菌，但它与发芽酵母的关系并不密切，两种酵母的蛋白质序列和基因同源性在60﹪到90﹪。与酿酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是单倍体细胞......阅读全文
酵母活细胞染色
实验步骤展
酵母细胞破碎实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 玻璃珠破菌缓冲液仪器、耗材 玻璃珠拍打器实验步骤 1. 培养并收集酵母菌细胞，在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前，测定压紧细胞的体积，以下所有步骤均在4℃进行。2. 用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。3. 用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合，加4体积冰冷的酸洗
酵母细胞质粒提取步骤和酵母细胞破壁方法
酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒 容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。酵母细胞质粒提取 步骤1. 接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸 营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。2.第二天取一滴菌液于进行显微镜
酵母细胞中质粒的加工实验——从酵母细胞中分离质粒
利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1，它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长，而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株，通过分离温度不敏感菌落，那么就可能分离到一个可以互补这种突
酵母菌细胞密度检测
实验材料 酵母菌仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 1. 在培养基中细胞的密度可以通过分光光度计测定的菌液在600 nm 波长的光密度OD600值来放映。2. 要得到可靠的测量结果，菌液最好稀释到OD600值1以下，在这个范围内，毎0.1OD600相对于约3×105细胞/ml。如此推算，1OD
酵母细胞核制备
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 细胞核缓冲液Ficoll缓冲液仪器、耗材 匀浆机实验步骤 1. 将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD600≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离心5 min。 2. 确定酵母细
酵母细胞的观察实验
酵母细胞的直径大约 5 pm，它们的很多重要特征在光学显微镜下都能够观察到。在实验室中，最好定期在相差显微镜下观察酵母培养物，以掌握细胞的生理状态以及污染情况。很多现代酵母细胞生物学研究采用复杂检测方法，用蛋白质特异抗体或特异结合某些细胞器的荧光染料对酵母细胞染色，近来，开始使用绿色荧光蛋白（G
酵母细胞的观察实验
酵母细胞的直径大约 5 pm，它们的很多重要特征在光学显微镜下都能够观察到。 在实验室中，最好定期在相差显微镜下观察酵母培养物，以掌握细胞的生理状态以及污染情况。很多现代酵母细胞生物学研究采用复杂检测方法，用蛋白质特异抗体或特异结合某些细胞器的荧光染料对酵母细胞染色，近来，开始使用绿色荧光蛋白（GF
酵母细胞质粒分离实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD仪器、耗材 接种针培养瓶摇床实验步骤 1. 挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非选择性培养基，于30℃培养过夜。 2. 在非选择性平板上于30℃培养2天以得到单菌落，大多数情况下，可以得到约200~300个单菌落（约每平板100个菌落）。 3.
酵母细胞质粒分离实验
在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丟失频率大约1%，采用本方案不易分离除去的一个质粒是内源性2 μm 质粒，2 μm DNA自发丢失的频率约为每代10-4。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD仪器、耗材接种针培养瓶摇床实验步骤1. 挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非
将DNA导入酵母细胞实验
乙酸锂转化 电穿孔转化 单链高分子质量载体DNA的制备 实验方法原理 实验材料
将DNA导入酵母细胞实验
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DN
酵母菌细胞的诱变实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材 试管摇床离心机平板实验步骤 1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5
酵母菌细胞密度检测实验
实验材料酵母菌仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 在培养基中细胞的密度可以通过分光光度计测定的菌液在600 nm 波长的光密度OD600值来放映。2. 要得到可靠的测量结果，菌液最好稀释到OD600值1以下，在这个范围内，毎0.1OD600相对于约3×105细胞/ml。如此推算，1OD600
酵母菌细胞融合实验
实验概要学习酵母菌原生质体制备和再生技术，为了解酵母菌为材料的外源基因转移等技术奠定基础。实验原理酵母菌如酿酒酵母，在遗传学和分子生物学的研究中有很大作用，尤其是近些年来，随着科技的进步，酵母菌的遗传操作如转化、基因克隆和外源基因在酵母受体中的表达等技术都有了突破性的进展。作为受体系统的酵母菌原生质
酿酒(芽殖)酵母和非洲粟酒裂殖酵母细胞的培养
实验概要本实验主要进行了了酿酒(芽殖)酵母和非洲粟酒裂殖酵母的培养，目的是掌握酵母细胞的培养方法及学会使用相差和微分干涉显微镜。实验原理酿酒(芽殖)酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌株在复合液体培养基中的倍增时间为90
酵母细胞中质粒的加工实验
定位突变质粒缺口修复技术和等位基因修复技术实验材料酵母菌株试剂、试剂盒带选择标记的YRp或YCp质粒适当的限制性内切核酸酶相应选择标记突变的酵母菌质粒标记的选择培养基平板仪器、耗材培养皿实验步骤1）将目的基因亚克隆到带恰当的选择标记的YRp或YCp质粒上。2) 在基因内部的两个限制酶酶切位点上切割以
酵母细胞中质粒的加工实验
实验方法原理 在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丢失频率大约1%。 在本方案中含质粒的酵母菌株接种于非选择性平板上以分离质粒并可得到单菌落。然后通过影印到选择性平板上可以鉴别丢失了质粒的菌株实验材料 含质粒的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD或其他非选择性液体培养基及平板CM缺失成分
酵母细胞破碎实验——液氮破碎法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒液氮仪器、耗材塑料烧杯混合器实验步骤1. 酵母在YPD（或选择性）培养基中剧烈振荡下培养至对数中期。离心，弃上清，市售酵母糕可以用来代替培养细胞。2. 在旋涡混合器上振荡细胞沉淀，使其形成粘稠的细胞糊，必要时，加入最少量的冰水使细胞糊能够倒出或舀出，如果使用酵母糕，用等
酵母感受态细胞制备实验
化学法 试剂盒制备法 实验方法原理 感受态是受体最容易接受外源DNA片段并实现转化的一种生理状态，用对应化学物质处理细胞后，细胞逐渐形成感受态细胞并
CHO细胞表达系统与酵母细胞表达系统比较
CHO细胞表达系统与毕赤酵母表达系统是当前发展前景看好的两个表达系统，为了能够更加直观地对两个表达系统有一定的认识，特意在此篇中对两个表达系统作一定的比较，从而能够更进一步的对两个表达系统有更深的了解1．CHO细胞表达系统 （1）优点 CHO细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生
如何区别酵母提取物、酵母浸粉、酵母粉和酵母浸膏？
酵母浸粉的介绍： 酵母浸粉又称酵母提取物，是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味，易溶于水，水溶 液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性，请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种
细胞学：如何用酵母细胞检测遗传感染！
DIC显微术中的酿酒酵母细胞。图片来源：维基百科。研究酵母细胞的ETH研究人员发现了一种从病原体或环境污染中检测外来遗传物质并使其无害的新机制。在其悠久的历史过程中，细菌已经形成了一种有效的免疫系统，可以检测和抵御来自病毒或竞争细菌的入侵遗传物质。在单细胞生物体中这种“先天”免疫防御的一个要素是CR
酵母细胞的培养与观察操作指南
一、实验目的1.掌握酵母细胞的培养 方法2.学会使用相差和微分干涉显微镜二、异源互补技术概述酿酒(芽殖)酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌 株在复合液体培养基中的倍增时间为90～120min，到静止期时细胞滴度为3
毕赤酵母原生质细胞的制作
实验概要本实验介绍了毕赤酵母原生质细胞的制作方法，以备转化。实验原理毕赤酵母细胞壁阻止摄入DNA，有必要去除部分细胞壁以吸收DNA。藤黄节杆菌酶是一种葡聚糖酶，可在细胞壁水解葡聚糖的β－1，3接头，还可部分地消化细胞壁。该方法的关键在于不能过度消化细胞壁，否则会导致细胞死亡。藤黄节杆菌酶消化能力受细
真菌/酵母样品细胞细胞周期碘化丙啶红色荧光流式细胞
真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光 流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 YIJI真菌/酵母细胞样品细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定真菌/酵母细胞中D
酵母菌的形态观察及死细胞、活细胞的鉴别
基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料
酵母细胞中质粒的加工实验_穿梭质粒
实验材料带有一个非URA3选择标记YCp载体试剂、试剂盒缺失成分平板+Ura含有5-FOAYCp质粒选择性培养基的平板YPD平板YIP5载体仪器、耗材培养皿实验步骤1) 构建染色体上重要基因被破坏的单倍体菌株以及含有完整重要基因和URA3选择标 记的YEp或YCp质粒。2) 对于诱发突变，将重要基因
技术和方案19－酵母－DNA－流式细胞记数
试剂、试剂盒TE 缓冲液胃蛋白酶溶液SYTOX Green染色缓冲液实验步骤1.生长和收集细胞。细胞生长至 5X106 个/ml，离心收集 10 ml 样品，并用 5 mlTE 缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在 1.5 ml 水中。2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无
啤酒酵母培养生产单细胞蛋白实验
实验方法原理 单细胞蛋白是通过培养单细胞微生物获得的菌体蛋白质。酵母菌、丝状真菌、微型藻类及非病源细菌等单细胞微生物均可用于生产单细胞蛋白，其中酵母菌是生产单细胞蛋白的主要单细胞微生物。多种原料可用于生产单细胞蛋白，如秸秆、薯干、石油、甲烷等，特别是一些工业废水、废渣可用来生产单细胞蛋白饲料，废物利