单克隆抗体培养—含有单克隆抗体的腹水制备
实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)裸 鼠 ， 6〜8 周龄，无 特 殊 病 原（SPF)，或者是同基因型宿主（注射小鼠-小鼠杂交瘤时）姥 鲛 焼（Pristane， 2,6，10，14-四甲基十五焼； Aldrich 公司提供）杂 交 瘤（单 元 1.3)添 加 10 mmol/L HEPES 和 lmmol/L 丙酮酸钠的 DMEM-10 完 全（附 录 1 ) 培养基PBS 或 HBSS，已消毒，不 含 FBS1 0 % (m/V) 叠氮钠18 G 和 20 G 或 22 G 注射针头175 cm2 组织培养用细颈瓶50m l 和 15 ml 塑料锥底离心管，无菌Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）IOml 注射器，无菌56°C 水浴0.45um 过滤装置1.于接种细胞前一周，用 20 G 或 22 G 针头给每一只小鼠腹腔内注射姥鲛烷 0.5〜lml。始终保证小鼠处于 SPF 设施中。远交......阅读全文
单 克 隆 抗 体 的 制 备——有限稀释克隆法
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)候 选 杂 交 瘤 系（见辅助方案 2)克隆和扩增用培养基（见辅助方案 4)微 孔 板 观 察 镜（由 Flow 实验室或 Dynatech 公司提供），可选的1.重悬候选杂交瘤所在孔中的细胞（见 辅 助 方 案 2 , 步 骤 4)，用血细胞计数器
多 克 隆 抗 血 清 的 制 备2
使 用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法实验步骤用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法附 加 材 料（其他材料见基本方案）TiterMaxttR-I (CytRx; 4°C 下储存少于 24 个月）或 Ribi 佐 剂 系 统（RAS
单 克 隆 抗 体 的 制 备——细胞融合与杂交瘤分选
实验步骤 在 筛 选 检 测（辅助方案 1 ) 方案完善之前不应进行细胞融合。由于在细胞融合后可对目标单克隆抗体进行检测的次数是有限的，在细胞融合前必须检查条件培养液以排除筛选时可能出现的人为因素影响。材 料SP2/0-Agl4 骨 髓 瘤 细 胞 系（药物标记的非分泌型； ATCC)添加10 mm
单 克 隆 抗 体 的 制 备——杂交瘤的建系
实验步骤 在单克隆抗体的特异性得到充分验证之前，应该对所有候选的杂交瘤进行建系。但为了减少不必要的工作量，可以选择其中 2 0 个最佳的候选孔。在检测这 2 0 个孔的培养上 清（见辅助方案1 ) 为阳性后，应该将这些孔的细胞进行冻存，同时进行有限稀释。附 加 材 料（其他材 料 见 基 本 方 案
单 克 隆 抗 体 的 制 备——杂交瘤培养上清的筛选分析
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)在 9 6 孔板中生长的杂交瘤（见基本方案 2)添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 养 基（附 录 1)多道移液器和9 6 孔板，可选的1.在倒置显微镜下观察生长的杂交瘤的孔数。确定是对所有孔进行细胞筛选还是只筛选
单 克 隆 抗 体 的 制 备——克隆和扩增用培养基的制备
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)小鼠（以 BALB/c 小鼠为例）， 5 或 6 只 ， 4〜6 周龄，无 病 原 体（有可靠来源，避免支原体感染）75 cm2 组织培养用细颈瓶0.45 过滤装置1.用颈椎脱臼法或二氧化碳窒息法处死 5 或 6 只 小 鼠（附 录 2 G; 避免使
单 克 隆 抗 体 的 制 备——单克隆抗体制备中的免疫接种
实验步骤 材料靶抗原：表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗 氏 完 全 佐 剂（ complete Freunds adjuvant， CFA)， Sigma 公司实验动物：无 病 原 体 大 鼠 、小 鼠（推 荐 使 用 BALB/c小 鼠）或 仓 鼠（推荐使用C
人 NK T 细 胞 的 分 离 和 扩 增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
T 淋巴细胞增殖实验
实验步骤基 本 方 案 1 未 致 敏 T 淋巴细胞的活化材 料备选方案1 用抗体激活未致敏的T 细胞这种方法适用于当抗C D 3/T C R 复合物抗体不能有效结合小鼠辅助细胞上的F c 受体 ，或其可溶形式不能有效活化T 细胞时。值得注 意 的 是 ，在 某 种 抗 体（如 抗 G 7、Thy-