免疫印迹与免疫检测

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液仪器、耗材 摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤 1. 制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2. 电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3. 将转移盒放入一个较大的托盘中,加入足量的能盖没整个转移盒的转移缓冲液。 4. 在塑料转移盒的底边,依次将下面物品组装转印夹层垫或海绵,一张剪切得如凝胶大小的滤纸,并预先以转移缓冲液湿润凝胶,用一试管或玻璃棒在凝胶表面缓慢滚动,以排去凝胶和滤纸间的气泡。 5. 准备转印膜,按凝胶大小但各边都比凝胶大约1 mm 剪膜。成45。地慢慢将凝胶放入蒸馏水中,水将会渗进膜中并润湿整个表面。然后在转移缓冲液中平衡10~15 min,PVDF膜短暂地在100%甲醇......阅读全文

免疫印迹与免疫检测

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液仪器、耗材 摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤 1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 m

免疫印迹与免疫检测实验——第二抗体欧联物进行免疫检测

实验材料蛋白质试剂、试剂盒封闭缓冲液TTBS缓冲液第一抗体TBS缓冲液仪器、耗材手套摇床实验步骤1.  将膜放入可热密封的塑料袋,加5 ml 封闭液,密封塑料袋,在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2.  用封闭液稀释第一抗体(取决于抗体和检测系统,以1:10~1:100 000稀释)。

免疫印迹与免疫检测实验——发光底物显迹

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发光底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材保鲜膜摇床实验步骤1.  用50 ml 底物缓冲液洗膜两次以平衡膜,每次15 min。 2.  对于使用硝酸纤维素膜或PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应:膜置于Nitro-Block溶液中5 min,然后以50 ml 底物缓冲液

免疫印迹与免疫检测实验——发色底物显迹

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris缓冲液发色底物显迹液PBS磷酸盐仪器、耗材摇床实验步骤1.  在室温以PBS洗膜15 min 以去除过量的磷酸盐和Tween 20。2.  将膜放入发色底物显迹液,条带应在10~30 min 内出现。3.  用蒸馏水洗膜,终止反应。晾干后拍照留永久的记录。

免疫印迹与免疫检测实验——亲和素生物素偶联

实验材料蛋白质试剂、试剂盒TTBS缓冲液TBS缓冲液过氧化物酶碱性磷酸酶仪器、耗材摇床硝酸纤维素膜尼龙膜实验步骤1.  在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜,需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。2.  用TTBS溶液(用于硝酸纤

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

免疫印迹与免疫检测实验——半干转移系统转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材半干燥转移装置滤纸实验步骤1.  制备样品,并在小型或标准尺寸的单向或双向凝胶上分离蛋白质。 2.  准备转印膜3.  拆卸凝胶夹层,除去积层胶。4.  组装转印夹层:Mylar聚酯薄膜屏蔽物3张以转移缓冲液饱和的滤纸已平衡的转印膜凝胶3张以转移缓冲液饱

免疫检测方法

免疫检测方法大全2017  免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测,对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对

免疫检测方法

免疫检测方法大全2017  免疫学检测技术的用途非常广泛,它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测,对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对

免疫检测的定义

中文名称免疫检测英文名称immunological detection定  义定性、定量测定免疫分子和免疫细胞,并分析其临床意义,包括细胞免疫检测和体液免疫检测。应用学科免疫学(一级学科),概论(二级学科),免疫学相关名词(三级学科)

免疫检测知识

5.3.2常规条件下已知值质控血清变异(routine conditions variance-known value,简称RCVK)的测定。  做常规检验的技术人员,在常规检验的条件下,将质控血清放在常规检测样本中,进行20次检验,结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可

Western免疫印迹

 Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理    与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝

免疫印迹定义

  免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏

Western-免疫印迹

实验概要Western免疫印迹(Western   Blotting)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似,但Western   Blot采用的是聚丙烯

免疫印迹法

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

免疫印迹优点

  免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点:  1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作;  2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔;  3、 免疫印迹分析只需少量试剂;  4、 孵育、洗涤的时间明显减短;  5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析

常见的免疫检测技术

(一)皮内试验 (intrader rpmal test,ID) 宿主在病原体刺激后,体内产生亲细胞性抗体(IgE和IgG4)。当其与相应抗原结合后,肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒,释放生物活性物质,引起注射抗原的局部皮肤出现皮丘及红晕,以此便可判断体内是否某有种特异性抗体存在。 (二)免疫扩散(

常见的免疫检测技术!

  (一)皮内试验 (intrader rpmal test,ID) 宿主在病原体刺激后,体内产生亲细胞性抗体(IgE和IgG4)。当其与相应抗原结合后,肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒,释放生物活性物质,引起注射抗原的局部皮肤出现皮丘及红晕,以此便可判断体内是否某有种特异性抗体存在。   (二)免疫

免疫印迹法过程

免疫印迹法 是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0

什么是免疫印迹?

  免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏

免疫印迹的优点

免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点:1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作;2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔;3、 免疫印迹分析只需少量试剂;4、 孵育、洗涤的时间明显减短;5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析和鉴定;6、结果以图谱形

免疫学实验感染免疫检测介绍

  感染免疫检测介绍:   人的免疫力随结核分支杆菌或其成分在体内存在而存在,故被称为感染免疫,或称有菌免疫,一旦体内结核分支杆菌或其成分全部消失,免疫力也随之消失。因此要进行感染免疫检测。   感染免疫检测正常值:   各项的检测结果呈阴性。   感染免疫检测临床意义:   异常结果:一

免疫酶染色试验_免疫印迹法

免疫印迹法 (以检测流行性出血热病毒结构蛋白和 NP 核蛋白为例说明)实验方法原理免疫印迹法 是将电泳与免疫酶染色结合起来的一种方法。它先经电泳 (SDS--PAGE)将病毒结构蛋白进行分离,通过转印将被分离的各区带原位转移到硝酸纤维素膜 (nitrocellulose membrane, NC 膜

关于免疫检测的相关介绍

  免疫力低下人群易患肿瘤:肿瘤的发生、发展、复发率和存活期等都与机体的免疫状态有密切关系。人类的免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子和淋巴循环网组成。免疫细胞通过血液循环前往全身各器官和组织。  通过对人体外周血中的T淋巴细胞亚群比例变化的定量分析、T细胞抗原受体(T CELL RECEPTOR

细菌感染免疫检测的概述

  细菌感染免疫检测指在体外用已知抗体(或抗原)检测抗原(或抗体),是临床细菌性疾病诊断和病原菌鉴定的重要手段之一。用已知抗体(即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等)检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原。或者用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化,作为某些感

免疫检测的基础知识

ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1 抗原  抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结

什么是细菌感染免疫检测

  细菌感染免疫检测指在体外用已知抗体(或抗原)检测抗原(或抗体),是临床细菌性疾病诊断和病原菌鉴定的重要手段之一。用已知抗体(即含特异抗体的免疫血清或单克隆抗体等)检测标本中或分离培养物中未知细菌的种、型或细菌抗原。或者用已知细菌或特异性抗原检测患者血清中有无相应抗体及其效价的动态变化,作为某些感

酶联免疫检测仪

  为保证测量数据的准确可靠,开机后应预热15分钟以上。   1.波长设定   在开机或复位状态下,按屏幕提示操作即可。波长一经设定好,则全部功能均为在该波长下的操作。显示波长应与仪器上安装的滤光片波长相一致。   2.手动测量   该功能只测样品的吸光度值,按一次测量键显示一个OD值,不打

免疫检测的基础知识

ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 1.1 抗原   抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗

免疫检测HIV感染的“瑕疵”

  临床上曾进行过多种免疫疗法,包括被动输入HIV特异的抗体或细胞,细胞因子调节免疫的疗法,但均由于不能从根本上控制HIV的大量和迅速复制而未获很有意义的结果。丙种球增强感染者的非特异性免疫力。近年来由于联合抗病毒疗法用于慢性感染者时有效的抗病毒治疗后特异性免疫恢复困难,因此出现了疫苗加抗病毒治疗、