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三篇Nature子刊:如何克服CRISPR的脱靶效应

规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合,原本是细菌抵御病毒的重要武器,现在这一组合已经成为了一个通用工具,被用于在真核生物中进行位点特异性的基因组修饰。 最近Nature Biotechnology杂志上发表了三个研究团队的研究成果,研究人员深入分析了CRISPR的脱靶效应,并提出了非常可行的解决之道。 CRISPR系统修改目的基因的简便性,让几乎所有实验室都有可能随心所欲的进行基因组编辑。你需要做的只是,在自己感兴趣的细胞或生物中,表达Cas9内切酶和引导RNA(gRNA)。引导RNA是一段与目标DNA片段匹配的短RNA,它指导着CRISPR-Cas9的DNA剪切活性。 不过困扰其他定向核酸酶的老问题——脱靶效应,也同样影响着CRISPR系统。人们发现,Cas9会在基因组的一些脱靶位点进行剪切。弗吉尼亚大学Mazhar Adli等人的研究显示,在人类基因组中Cas9除了结合目的基因以外,还殃及了许......阅读全文

盘点全基因组检测CRISPR脱靶位点的几种重要技术

  在2013年,来自麻省总医院的研究人员发现使用CRISPR-Cas RNA引导性核酸酶的一个重要局限:会在预期靶点以外的位点上生成多余的DNA突变。此后陆续有研究直接说明了CRISPR/Cas9存在严重的脱靶性,即该技术可以发生非特异性切割,引起基因组非靶向位点的突变,这样会造成研究结果的不确定

Detect-seq技术为碱基编辑领域内提供了CBE脱靶位点

  2021年6月8日,北大-清华生命科学联合中心、北京大学生命科学学院伊成器教授课题组在Nature Methods杂志发表了题为“Detect-seq reveals out-of-protospacer editing and target-strand editing by cytosine

分子细胞中心等研发出系统性鉴定siRNA脱靶位点新方法

  12月4日,Molecular Therapy–Nucleic Acids在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)吴立刚研究组,上海市计划生育科学研究所李卫华研究组与扬州大学赵雅研究组合作的研究成果Identifying Cleaved and Noncleav

Rosa2-基因组中的安全位点

当我们提到“safe harbour”,你首先想到的什么呢?我们今天要讨论的不是船只安全停泊的港口,而是小鼠基因组中外源基因定点整合的安全位点。接下来就让我们一起探索小鼠基因组中的最经典的安全位点之一:Rosa26,作为基因组中的安全位点是种怎样的体验吧。 Rosa26:安全这块我拿捏的死死地! 随

CRISPR新工具开辟更多可编辑基因组位点

  据最新一期《科学进展》报道,美国麻省理工学院(MIT)研究人员发现了一种可靶向几乎一半基因组位点的Cas9酶,从而极大地扩展了基因编辑工具的适用范围。  尽管基因编辑工具近年来取得了相当大的成功,但CRISPR-Cas9在基因组上可访问的位点数量仍然有限。这是因为CRISPR需要在基因组靶向位点

识别位点

中文名称识别位点英文名称recognition site定  义限制性内切酶特异结合的核苷酸序列。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞遗传(二级学科)

剪接位点

中文名称剪接位点英文名称splicing site;splice site定  义剪接体可识别的RNA前体中内含子和外显子连接边界的序列和接头位点。根据位置不同可以分为供体和接纳体剪接位点。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)

进入位点

中文名称进入位点英文名称entry site定  义特指氨酰tRNA进入核糖体的部位。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科) 

加帽位点

中文名称加帽位点英文名称cap site定  义mRNA中加帽结构的部位,该位点在前体mRNA的5'端。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

人类基因组“pri-miRNA”剪切位点图谱绘制

  人体的基因表达是一个复杂的过程,那么多的基因不可能都总是持续表达。指挥基因表达的功臣之中就包括几种RNA分子。MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,它是一种古老的、生死攸关的基因调节因素,30-60%的哺乳动物蛋白质编码基因都受miRNA的调控(主要是基因沉默调控