酵母前体mRNA剪接提取物实验
实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。 实验材料 tRNA UTP RNA 聚合酶 试剂、试剂盒 YP Tris-HCl ETDA SDS 甘油 HEPES 钾盐 DTT PMSF ......阅读全文
Polyadenylation of mRNA
Gene expression requires the coordination and integration of multiple processes, including transcription, splicing, polyadenylation, nucleocytoplasmic
mRNA差异显示技术(mRNA differetial display)(2)
6.技术路线 mRNA 差异显示技术 The fluoroDD System •Builds on the HIEROGLYPH™ system –TMR-labeled anchored primers –Increased primer concentrations –I
mRNA工艺技术平台之mRNA制剂
mRNA疫苗或药物的生产工艺，主要分为质粒DNA原液制备、mRNA原液制备、mRNA制剂制备三个阶段。本文讨论第三阶段的工艺平台，也是当前挑战最大的环节。 关键的制剂技术突破解决了mRNA的成药性问题，使其从60年的科研之路走向临床商业化应用，并在此次新冠疫苗应用中大放异彩。据公开信息， BN
mRNA差异显示技术(mRNA differetial display)(1)
1.概 述mRNA差异显示技术（mRNA differetial display）是一种快速有效的克隆差异性表达基因的方法。 方法建立：1992年 Liang P和Pardee首次应用DD技术对比人类乳腺癌细胞与正常细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所特有的基因 目前已应用于个各领域：
mRNA的分离
与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行
mRNA的分离
与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用 oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA
mRNA的分离
与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行
mRNA的纯化
实验概要本文介绍了mRNA的纯化方法。实验原理mRNA的分离方法较多，其中以寡聚（dT）-纤维素柱层析法最为有效，已成为常规方法。此法利用mRNA 3‘末端含有Poly（A ）的特点，在RNA流经寡聚（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液的作用下，mRNA被特异地结合在柱上，当逐渐降低盐的浓度时或在低
如何提取mrna
1 细胞总RNA的提取1）、6孔板细胞（CNE-2）汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂（Gibco公司） 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟（观察：液体变粘稠,细胞脱壁）.2）、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml E
细胞凋亡mRNA检测
研究者们发现了很多在细胞凋亡时表达异常的基因，检测这些特异基因的表达水平也成为检测细胞凋亡的一种常用方法。据报道，Fas 蛋白结合受体后能诱导癌细胞中的细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells）等靶细胞。Bcl-2 和bcl-X （长） 作为抗凋亡（bcl-2 和bcl-X）的调节物，它们