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2、选择标记选择标记一般为对应于营养缺陷型受体的野生型基因，常用HIs4。由于P．Pasotris不利用蔗糖，所以也可用啤酒酵母的蔗糖酶基因suC2作为标记。AMP：氨苄抗性基因，可在大肠 杆菌中筛选。G418和Zeocinr(Invitrogen，sandiego，CA)也是筛选标记，使得到高拷贝的转 化子，这是因为表达载体上外源基因和卡那基因相偶联。Zeocinr在E.coli和P.Pastoris宿主中都表达，因此缩短了穿梭载体的长度，但 Zeocin是一种强诱变剂，可能导致转化子产生突变。3、信号肽序列表达蛋白的分泌需要信号肽引导并沿一定途径才能分泌至细胞外。P.Pastoris自身分泌的蛋白质很少，分泌表达是一种理想的表达方式，胞外表达有利于蛋白质的提取和纯化，同时有助于不分泌型的蛋白质使其分泌，而像人血清蛋白(HSA)和牛凝乳酶(Rennin)，用自身信号肽序列即可在 P．Pastoris中成功表达。......阅读全文
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今