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PCR常见问题汇总(一)

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些zui好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板: ①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改。酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的......阅读全文

献给初学者:PCR 常见问题分析

  我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策,还有终极解决方案。  PCR 常见问题及解决方案  1没有扩展条带  可能的原因及对应的解决方案如下:   酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。  

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

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一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400

PCR技术大攻略

一、PCR技术及步骤聚合酶链式反应(PCR)PCR扩增产物的克隆上述两个实验包含基本原理、步骤、问题等。二、PCR常见问题汇总1. 没有得到扩增产物 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。

重磅!2016医疗器械注册工作报告

  2016年,国家食品药品监督管理总局(以下简称食品药品监管总局)贯彻落实《医疗器械监督管理条例》,按照《国务院关于改革药品医疗器械审评审批制度的意见》(国发〔2015〕44号),持续深入推进医疗器械审评审批制度改革工作,进一步加强对全国医疗器械注册工作监督和管理,加大现场核查和真实性抽查力度,不

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

浅析微电泳仪应用5大注意事项

  详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答   PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,

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TRAP法端粒酶活性检测实验操作方法及疑难解答

Kim应当不会预测到,他在1994年发明的TRAP会那么受欢迎,被一代又一代的研究者奉为端粒酶 活性检测首选方法。不过,TRAP法虽然灵敏度高,却同样存在瑕疵。下面为大家介绍的是根据TRAP法适当改良的研究专用试剂盒具体情况和使用方法以及常见问题解答。本品与通常的端粒 酶活性测定法相比较,具有以下特

PCR仪温控性能及常见问题分析

  PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-------------------------------

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体外诊断IVD行业主要仪器和试剂品牌汇总

体外诊断,即IVD(In Vitro Diagnosis),是指在人体之外,通过对人体样本(血液、体液、组织等)进行检测而获取临床诊断信息,进而判断疾病或机体功能的产品和服务。体外诊断产品主要由诊断设备(仪器)和诊断试剂构成。根据我国国家食品药品监督管理局(SFDA)的《医疗器械分类目录》标准,体外

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认监委组织58项检验检疫行业标准方法进行标准验证

  各直属检验检疫局,中国检验检疫科学研究院,各检验检疫标准化专业技术委员会:  为提高检验检疫方法标准的科学性、严谨性和适用性,进一步提升检验检疫行业标准质量,2017年,国家认监委拟继续对检验检疫行业标准中方法标准进行验证工作。现将有关事项通知如下:  一、验证项目  具体项目及承担单位清单详见

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

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鼠疫有多可怕?这些检测手段来帮忙

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琼脂糖凝胶电泳的原理及实验过程

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创新or围剿?一场关于基因检测体外诊断的争夺战!

  7月23日,国家食品药品监督管理总局CFDA批准了广州燃石的人EGFR/ALK/BRAF/KRAS基因检测试剂盒[1],这是CFDA批准的中国首个基于NGS的肿瘤伴随诊断试剂盒,在我国体外诊断领域具有里程碑式的意义。  基因检测从最初单个基因检测到一组基因检测,再到现在大panel检测,从PCR

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