胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够在大肠杆菌细胞中复制，在酵母细胞中表达，即大肠杆菌－酿酒酵母穿梭载体。本实验采用了不带ATG起始位点的pYES2.1/V5-His-TOPO质粒，进行酿酒酵母重组载体的构建，研究非融合目的蛋白在酵母细胞中复制或表达的状况，为利用该重组酿酒酵母作为饵料饲养海洋线虫P. redivivus提供材料。主要试剂1. 主要试剂(盒) 1) pYES2.1 TOPO TA Expression Kit，美国Invitrogen公司； 2) S. c. EasyComp Trans......阅读全文
胞内晶体蛋白基因的酿酒酵母真核表达
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够
真核基因表达载体的构建
提高目的基因在哺乳动物细胞中表达的策略：1、DNA水平：增加基因拷贝数(1)高拷贝载体；（2）基因共扩增；2、转录水平：利用强启动子、增强子，可诱导启动子，如CMV、Tet；3、翻译水平：优化翻译起始序列和非编码区序列。本篇文章来源于网络，如有异议请联系我们，我们将在3个工作日内作出处理。
真原核基因表达的区别
1、原核生物染色体为一个基因连锁群，而真核为两个或以上，当一个有缺陷时另一个可以补充；2、原核生物染色体不与组蛋白结合，省去的解聚的步骤；3、原核生物的转录与翻译都在同一区间，而真核是分开的；4、真核生物基因内有内含子，mRNA会有一个自我剪接的修饰过程，原核生物则不会；5、真核生物蛋白质的翻译后修
酿酒酵母胞内代谢通量调控机制方面获进展
细胞内的代谢通量受胞内基因表达、转录调控、蛋白修饰、别构效应等调控体系共同作用。然而，目前关于细胞内代谢通量的详细调控机制存在较多未知，例如代谢通量的变化到底在多大程度上依赖基因表达以及有多大程度通过酶活力调控。酿酒酵母的Crabtree效应是重要的代谢调控表型，但该表型下各种调控因子对胞内代谢
毕赤酵母表达系统能在酿酒酵母里表达么
不太可能，Invitrogen的商业化毕赤酵母表达系统属于甲醇酵母表达系统，用的是毕赤酵母独有的AOX1启动子，由甲醇诱导；酿酒酵母用的启动子大多用的是GAPDH或Gal启动子等，由葡萄糖和半乳糖诱导。虽然两种菌株有很多基因具有较高的同源性，但不能通用。建议使用毕赤酵母表达系统，酿酒酵母表达量低，诱
瞬时转染真核基因表达调控技术
调节瞬时转染基因的表达l 四环素作为哺乳动物细胞中可诱导基因表达的调控物阶段一：pTet-tTAk稳定转染成纤维细胞培养和转染细胞1. 在DMEM完全培养液中培养贴壁细胞。转染前一天，把细胞换到含有0.5μg/ml四环素-HCl（四环素）的DMEM完全培养液中。每个10 cm培养
瞬时转染真核基因表达调控技术
调节瞬时转染基因的表达*四环素作为哺乳动物细胞中可诱导基因表达的调控物阶段一：pTet-tTAk稳定转染成纤维细胞培养和转染细胞1. 在DMEM完全培养液中培养贴壁细胞。转染前一天，把细胞换到含有0.5μg/ml四环素-HCl（四环素）的DMEM完全培养液中。每个10 cm培养皿中加入足量细胞，使转
关于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)表达系统的介绍
酿酒酵母(Saecharomycescerevisiae)在酿酒业和面包业的使用已有数千年的历史，被认为是GRAS(generally recognized as safe)生物，不产生毒素，已被美国FDA确认为安全性生物，但酿酒酵母难于高密度培养，分泌效率低，几乎不分泌分子量大于30 kD的外
真核生物与原核生物基因表达调控的差异
原核生物同一群体的每个细胞都和外界环境直接接触，它们主要通过转录调控，以开启或关闭某些基因的表达来适应环境条件（主要是营养水平的变化），故环境因子往往是调控的诱导物。而大多数真核生物，基因表达调控最明显的特征是能在特定时间和特定的细胞中激活特定的基因，从而实现“预定”的，有序的，不可逆的分化和发育过
真核生物基因表达调控有哪些环节
可分为三种主要途径环节：1、遗传调控（转录因子与靶标基因的直接相互作用）；2、调控转录因子与转录机制相互作用，3、表观遗传调控（影响转录的DNA结构的非序列变化）。转录调控通过转录因子直接调控靶标DNA表达是最简单和最直接的转录调控改变转录水平的方法。基因的编码区周围通常都具有几个蛋白质结合位点，具
目的基因在真核系统中的表达及细胞内的定位实验
实验方法原理 将氯化钙，DNA和磷酸缓冲液混合，形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒（沉淀）。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。实验材料 真核细胞试剂、试剂盒 HBSCaCl2TE质粒DNA仪器、耗材 CO2培养箱实验步骤 1. 转染的前一天在35 mm培养皿中植入
真核表达系统的特点
真核表达系统的特点是蛋白翻译后加工机会多，甚至可被改造成人源型；真核细胞易被转染，具有遗传稳定性和可重复性；产物可被分泌，提纯简单，成本低。
目的基因在真核系统中的表达及细胞内的定位实验1
磷酸钙法瞬时转染法实验方法原理将氯化钙，DNA和磷酸缓冲液混合，形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒（沉淀）。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。实验材料真核细胞试剂、试剂盒HBSCaCl2TE质粒DNA仪器、耗材CO2培养箱实验步骤1. 转染的前一天在35 mm培养
毕赤酵母表达系统的特点
自从1987年Cregg等首次用巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）作为宿主表达外源蛋白以来,作为一种新的高效的表达系统，毕赤酵母越来越引起人们的重视，到1995年，已有四十多种外源蛋白在该宿主菌中获得表达。而最近几年每年报道的在毕赤酵母中表达的外源基因就有几十种，且一年比一年多，与其它
目的基因在真核系统的表达及细胞内的定位实验—荧光法
实验方法原理绿色荧光蛋白（Green fluorecent protein，GFP）最早是在海洋生物水母（Aequorea victoria）中发现的。GFP 蛋白的多肽链中含有特殊的生色团结构，可在紫外光源下发出稳定的绿色荧光，而且这种荧光发射无需外加辅助因子或进行任何特殊处理。GFP 标记分子最
酵母质粒载体的基本信息介绍
酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。由于质粒DNA与酵母基因组DNA之间发生了同源重组,在转化的细胞中可以检测到质粒的整
重组蛋白真核表达系统与原核表达系统的区别
重组蛋白真核表达采用原核表达系统进行研究，主要方法是将已克隆到目的基因DNA的片段的载体转化到细菌中，通过IPTG诱导和终纯化获得所需的目的蛋白。其优点是可以在短时间内获得基因表达产物，所需成本相对较低。 目前的表达系统各有利弊，但一般理想的表达系统满足以下几点：一是特异性，不受其他内源性因素
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（1）
大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、周期短、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在
真核生物基因表达调控发生在哪些水平上
真核生物基因表达的调控远比原核生物复杂，可以发生在DNA水平、转录水平、转录后的修饰、翻译水平和翻译后的修饰等多种不同层次（真核生物基因表达中可能的调控环节）。但是，最经济、最主要的调控环节仍然是在转录水平上。DNA水平上的调控是通过改变基因组中有关基因的数量、结构顺序和活性而控制基因的表达。这一类
概述酿酒酵母的基因组序列
1996年6月，在国际互联网的公共数据库中公布了酿酒酵母的完整基因组顺序，它被称为遗传学上的里程碑。因为首先，这是人们第一次获得真核生物基因组的完整核苷酸序列；其次，这是人们第一次获得一种易于操作的实验生物系统的完整基因组。 [10] 在酿酒酵母测序计划开始之前，人们通过传统的遗传学方法已确定
真核生物基因表达的dna水平调控包括什么方式
1、转录起始水平。这一环节是调控的最主要环节，由对基因转录活性的调控来完成，包括基因的空间结构、折叠状态、DNA上的调控序列、与调控因子的相互作用等。a.活化染色质：在真核生物体内，RNApol与启动子的结合受染色质结构的限制，需通过染色质重塑来活化转录。常态下，组蛋白可使DNA链形成核小体结构而抑
甲醇酵母基因表达系统
1 甲醇酵母表达系统的特点 1.1 宿主 七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白（SCP），有很好的发酵基础，菌体密度可达100g/L干重。其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源，廉价而无毒。它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长，其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径
酿酒酵母在酿酒工业上的应用
酵母菌将葡萄糖、果糖、甘露糖等单糖吸入细胞内，在无氧的条件下，经过内酶的作用，把单糖分解为二氧化碳和乙醇，此作用即发酵。 酿酒酵母乙醇生成途径：葡萄糖是很容易利用的碳源，许多微生物都能够利用葡萄糖发酵生产乙醇。酵母菌在厌氧条件下进行葡萄糖乙醇发酵，发酵过程包括葡萄糖酵解和丙酮酸的无氧降解两大生
上海生科院解析真核生物基因表达调控的新机制
2月29日，Nature Plants 杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物逆境生物学研究中心何跃辉课题组（植物环境表观遗传学实验室）题为Coupling of histone methylation and RNA processing by the nuclear mRNA Cap
酿酒酵母在生物科研上的应用
因酿酒酵母与同为真核生物的动物和植物细胞具有很多相同的结构，又容易培养，酵母被用作研究真核生物的模式生物。自1996年以来，酿酒酵母作为真核模式生物已经完成了全基因组测序、转录组分析、蛋白质相互作用网络图以及代谢功能图谱等工作。在众多的模式生物中，对酿酒酵母的研究最为深入，且最为广泛地被运用到各
“人造生命”－我国科学家“创造”世界首例单染色体真核细胞
日前，中科院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者，在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞：把酿酒酵母细胞里原本天然的16条染色体，人工融合成单条染色体，且仍具有正常的细胞功能。既改变了染色体的结构，又仍保有生命的“活性”，人工蜕变出一个全新细
真核表达文库的构建与筛选实验
实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤
真核表达文库的构建与筛选实验
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌 试剂、试剂盒
真核表达文库的构建与筛选实验
类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段：1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库；2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体
真核表达载体pcDNA3.1GFP的构建
【原理】引物中设计入限制酶位点：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互补碱基，因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端，即可与有互补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高，且当两引物中设计不同酶切位点时，可有效地定向克