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PCR各处应用模式

一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR 密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸,并避免引物3’末端兼并,针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序列分析。现已成功地克隆了猪尿酸氧化酶基因、糖尿病相关肽基因和哺乳动物与禽类的嗜肝病毒基因。用脱氧肌苷(deoxyinosine;DI)引物进行PCR,可以代替编码蛋白的多种兼并密码子中的兼并碱基,DI的特异性主要受cDNA浓度影响。表22-4 密码兼并性氨基酸密码子数M、W1C、D、E、F、H、K、N、Q、Y2I3A、G、P、T、V4L、R、S6 注:选择使用的肽链最好避开有4~6个密码子的氨基酸 二、套式引物(Nested ......阅读全文

实时荧光PCR检测技术

实时荧光PCR检测技术众所周知,PCR(聚合酶链反应)技术自从1985年问世以来,经过十几年的发展,已成为实验室的常规技术。它是现代分子生物学研究中不可缺少的手段,是一种极为敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法,核酸诊断是分子水平上的诊断技术,可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷,比如,核酸诊断能

PCR扩增仪的选择

1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法,1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源

PCR扩增仪的选择

1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法,1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源

PCR仪基因扩增仪的选择技巧

PCR仪基因扩增仪的选择技巧 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对原则复制成新的单链,与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现,DNA在高温时也可以发生变

PCR仪基因扩增仪的选择技巧

PCR仪基因扩增仪的选择技巧 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的作用下,以单链为模版,根据碱基互补配对原则复制成新的单链,与模版配对成为双链分子挎贝。在体外实验中发现,DNA在高温时也可以发生变

在选择PCR仪时要注意哪些参数呢?

        1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法,1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA

实时定量PCR应用中的优化方案

 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具[1]。随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,不仅建立了一系

PCR技术的基本原理及应用

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术,1985年美国PE公司人类遗传研究室发明了该项技术,Saiki等首先应用于镰状红细胞贫血的产前诊断,但由于操作方法繁琐未能全面推广应用。直到1988年耐热DNA聚合酶(Taq酶)的发现和应用,使PCR技术

PCR仪,你真的选对了吗?

  Kary Mullis博士也许并没有想到,他发明的PCR技术能够在未来三十年保持长盛不衰。这不仅要归功于DNA聚合酶的发展,也要归功于PCR仪的不断升级。如今,反应效率提高,反应体积减少,使得PCR逐渐应用在更广泛的领域。选购PCR仪,似乎并不是一件难事。然而,对于一些关键的参数,你真的了解它们

聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用-1

第一节 概述  聚合酶链反应或多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【摘要】目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。 结果 荧

你真的选对PCR仪了吗?

凯利·穆利斯(Kary Mullis)博士也许没有想到,他发明的PCR技术能够在未来三十年保持长盛不衰。这不仅要归功于DNA聚合酶的发展,也要归功于PCR仪的不断升级。如今,反应效率提高,反应体积减少,使得PCR逐渐应用在更广泛的领域。选购PCR仪,似乎并不是一件难事。然而,对于一些关键的参数,你真

PCR仪,你真的选对了吗?

  Kary Mullis博士也许并没有想到,他发明的PCR技术能够在未来三十年保持长盛不衰。这不仅要归功于DNA聚合酶的发展,也要归功于PCR仪的不断升级。如今,反应效率提高,反应体积减少,使得PCR逐渐应用在更广泛的领域。选购PCR仪,似乎并不是一件难事。然而,对于一些关键的参数,你真的了解它们

PCR原理与应用

聚合酶链反应(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一项体外基因扩增技术,1985年美国PE公司人类遗传研究室发明了该项技术,Saiki等首先应用于镰状红细胞贫血的产前诊断,但由于操作方法繁琐未能全面推广应用。直到1988年耐热DNA聚合酶(Taq酶)的发现和应用,使PCR技术

ABI Veriti96 PCR仪和艾本德PCR仪的区别

 样品通量上,ABI Veriti 似乎更胜一筹,再来看看二者在梯度功能上的比较。梯度功能:ABI Veriti96 PCR仪:用于PCR优化的多重控温区,其使用VeriFlex模块,25℃(5℃ zone-to-zone),技术可同时运行6种不同退火温度的PCR程序,配有6个独立的Pel

PCR技术应用十:HIV感染

  八十年代以来由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其严重的危害性而受到人们高度重视,力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在.聚合酶链反应(PCR)具有敏感、特异和快速的特点,是检测病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具.一、HIV的基因结构  HIV的基因

PCR Array 简单实用的检测基因表达的高通量方法

 简介:什么是PCR芯片?实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏,zui可靠的方法。通过在试验过程中,实时监测荧光染料的信号变化,反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广(能达到5个数量级),因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是,由于实时定量PCR需要制备

PCR仪温控性能及常见问题分析

PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天来聊一聊定性PCR仪最为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-----------------------------------------------

PCR仪温控性能及常见问题分析

  PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-------------------------------

PCR仪温控性能及常见问题分析

 PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-------------------------------------

PCR仪温控性能及常见问题分析

 PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-------------------------------------

2014年测序、克隆、细胞分析等技术展望

  新一代测序   新一代测序(NGS)技术一路走来,逐渐褪下其神秘面纱,进入越来越多的实验室。随着时间的推移,NGS系统从“高端大气上档次”的大型平台演化成满足个性化需求的台式测序仪。MiSeq、Ion Torrent和454 GS Junior这些仪器的上市,也推动了测序平台的普及。同

荧光定量PCR技术及其应用(一)

荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简

荧光定量PCR技术及其应用(一)

荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简

免疫PCR

免疫PCR             实验方法原理 主要由两个部分组成,第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(EL

免疫PCR

免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子,电泳定性,根据特异性PCR产物的有无,来判断待测

分子诊断与分子治疗是当代医学发展的必然

  医学科学发展的实践已经并且必将继续表明,科学与技术的发明和重大发现对医学科学的发展产生着重要的影响。诊断与治疗是医学科学的两个重要方面和组成部分,诊断与治疗学科的发展与进步也无不打上不同时代科学技术进步的烙印。   纵观医学诊断和治疗学科的发展历程,正是由于包括物理学、化学、免疫学、

浅述分子诊断的前世今生及未来

  分子诊断与治疗是当代医学发展的必然   纵观医学诊断和治疗学科的发展历程,正是由于包括物理学、化学、免疫学、分子生物学等学科在内的一个个犹如星斗般灿烂的重大发现和发明,才使得医学诊断与治疗学科与时俱进,不断丰富、发展与完善。 分子诊断学发展历程   以DNA双螺旋结构的模型提出为标志,分子

定 量 P C R

定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测,来评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR相对定量→绝对定量, 手工操作→自动化检测, 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大,则指

DNA扩增检测技术的应用

在药物的分析和研究,以及控制药物质量等方面有着广泛应用的药物分析检测技术,可以采用物理、化学等方式对药物进行系统的分析,并结合现代化学、光谱、色谱等技术对药品进行研究。DNA扩增检测技是现代生物学重大发现之一,也是现代药物分析中快速检测技术之一。作为人体生命的重要物质,核酸和蛋白的异常表达往往与癌症