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离子交换层析法蛋白质的纯化实验

实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换(指与蛋白质末端离子的交换);固定在树脂上。通过提高溶液中相反离子浓度或降低蛋白质所带电荷数等方法可将蛋白质从树脂上洗脱下来。利用此法,可根据不同蛋白质电荷性质不同而将其分离开来。若已知蛋白质的等电点,蛋白质分离的起姶策略就很容易制定了。如果是未知蛋白质,通过离子交换预实验可得到很多关于蛋白质的生物物理信息并指导进一步的纯化处理。实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 离子交换层析系统实验步骤 1. 离子交换树脂的选择阴离子交换树脂用于处理净电荷为负的蛋白质;阳离子交换树脂用于处理净电荷为正的蛋白质。DEAD 或 CM-Sepharose 等琼脂基的树脂对很多蛋白质都是适用的。1.1 离子交换树脂的类型离子交换树脂除了以阴、阳分类外,还分为强离子交换树脂和弱离子交换树脂。强离子交换树脂在大部分 pH 范围内离子化程度都......阅读全文

【最新通知】第三届生物制药分离纯化技术学术论坛

  【本届论坛特点】  前沿学术交流与实验技能培训班有机的结合在一起,让生物制药科研人员在了解新技术、新工艺、新材料等行业前沿动态的同时,有机会在国内外一线专家的指导下亲自上机操作,切实提高一线技术人员在研发和生产过程中解决实际问题的水平和动手操作能力。  强大的演讲嘉宾阵容,本次论坛将邀请近30位

第三届生物制药分离纯化学术技术论坛暨实验培训班

  【本届论坛特点】  前沿学术交流与实验技能培训班有机的结合在一起,让生物制药科研人员在了解新技术、新工艺、新材料等行业前沿动态的同时,有机会在国内外一线专家的指导下亲自上机操作,切实提高一线技术人员在研发和生产过程中解决实际问题的水平和动手操作能力。  强大的演讲嘉宾阵容,本次论坛将邀请近30位

【倒计时23天】给你7个参加分离纯化实验技能培训班的理由

  (一)大咖授课,机会难得  分离纯化行业的泰斗级专家黄骏雄老师与拥有多年蛋白纯化培训和项目指导经验的姜韬老师,作为主讲嘉宾,亲自授课。为确保培训效果,姜韬老师与黄骏雄老师在九月上旬亲临纳微科技,查看实验培训的设备与环境,为确保培训课程能达到最佳效果,带领工作人员完成预实验。  (二)小班授课,最

分离纯化实验培训班

  (一)实验班简介  为满足研发及产业工作中的实际需求,让从事生命科学研究与生物技术应用领域的专业人员更好、更快、更高质量地完成科研任务,纳微科技将同期举办小分子制备色谱分离纯化实验培训班和蛋白/抗体纯化高级实验技能培训班。两组实验培训班分别由两组不同老师进行授课。  时间:2016.10.15-

胰岛素受体与[125I]胰岛素的交联实验

胰岛素受体与[125I]胰岛素的交联实验标签: 胰岛素受体 [125I]胰岛素 蛋白质纯化与鉴定实验指南 第四单元 实验 5本实验介绍关于胰岛素受体与[125I]胰岛素的交联过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。胰岛素受体与[125I]胰岛素的交联实验实验方法原理 试剂、试剂盒

样品极性大且水溶性不佳,制备遇到难题怎么办?

近日,制备纯化实验室的纯化工程师接到某制药公司委托的样品制备纯化任务,需要对某极性很大且难溶于水的样品进行制备纯化。基于样品的性质,小钱首先想到了正相分离模式,但是经过小量样品的纯化预实验后,小钱发现样品在正相分离柱上保留太强以至于很难洗脱下来,看来正相模式是行不通了。没关系,还可以尝试反相分离模式

第四届制药分离纯化技术与学术大会(第四轮通知)

  第四届制药分离纯化技术与学术大会将于9月21日-22日在苏州独墅湖世尊会议中心举办,前三届累计参会人数超过1500多人,技术学术大会同技能培训班结合获得广泛好评和赞誉,已成为制药分离纯化领域的专业盛会,诚挚欢迎您及同行朋友们前来交流和学习。本届大会由苏州工业园区医药分离纯化产业联盟协会主办,以“

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

抗体纯化方法介绍

抗体制备制备出效价高,特异性强,稳定性好的抗体是免疫学实验取得成功的基础,抗体质量的好坏直接影响着研究者研究的成败,不同的免疫学实验方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE, WB等)对抗体的效价,浓度和纯度有不同的要求。我们知道,一般免疫血清中含有特异性抗体和非特异性抗体

细胞的纯化的两种方法

细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.常用的纯化方法有,酶消化法,细胞因子依赖纯化法,机械刮除法,反复贴壁法,电烙筛选法. 体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有

细胞的纯化的两种方法

细胞的纯化的两种方法细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.常用的纯化方法有,酶消化法,细胞因子依赖纯化法,机械刮除法,反复贴壁法,电烙筛选法. 体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代

中空纤维切向流过滤纯化HSV疫苗

简介单纯疱疹病毒2型(HSV-2)是溃疡性生殖器疱疹的主要病原,全球每年新增感染达2300万例,其治疗方式主要围绕口服抗病毒治疗展开,但已有HSV-2候选疫苗进入临床试验,包括灭活、活性衰减、亚单位、DNA及多肽疫苗等,其中,野生型病毒删除UL5和UL29基因构建的复制缺陷型HSV-2疫苗株病毒(d

重组G蛋白偶联受体的纯化实验

纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶); 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是,必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分,因为很多 GPCR—旦被去

专访:不可思议的蛋白质相变过程

   曾有位学者说过,生物界中似乎没有哪一个事件的悲壮程度可以与细胞分裂相比拟,因为为了新生命的诞生,老细胞需要撕裂瓦解,而这其中涉及的关键词之一就包括纺锤体。从表面上看,有丝分裂纺锤体(spindle)是一个具有橄榄球形状螺纹的球,它就像大力士海格力克,拉扯着染色体向两极移动,因此不言而喻这种结构

凝胶迁移实验(EMSA)

实验方法原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

Thermo Fisher推出最新RNA纯化试剂盒

来自纽约8月3日的消息,Thermo Fisher Scientific这一世界领先的科技公司宣布推出SurePrep™ RNA Purification Kits,这一试剂盒可以从生物样品中捕获所有大小的RNA分子,比如经纯化的全长大分子RNAs,或者是在信号途径中调控基因表达,在细胞死亡,器官发

用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B 分离磷酸肽实验

在进行蛋白质(phosphorylated protein) 的结构与功能分析时,接蛋白质水解后即能将磷酸肽与未修饰的(未磷酸化的)肽分开是很有助益的。可利用的最有效的方法之一是使用载有铁 (正铁离子)的金属螯合填料。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。暂未评分点评实验,有机会获丁当

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验

电泳实验的危害与防护注意事项

  1.DNA电泳与溴化乙锭   “DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA

DNA合成:你应该知道的秘密

  说起DNA合成,几位前辈师兄师姐们犹会提起上世纪90年代世行贷款买仪器,好些单位甚至医院都赶时髦买了DNA合成仪,买回来才发现自己那点合成需求和费用,委实买得起用不起,那昂贵的设备成了摆设。彼时国外DNA合成虽然质量好纯度高,可寄回来海关不好过,时间上实在伤不起,幸亏国内迅速崛起的几家

PCR扩增产物鉴定与纯化

实验概要通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,并对获得的产物进行割胶纯化回收,为接下来的DNA重组和转化实验提供外源DNA片段。实验原理琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物。(原理参照琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验) 本实验使用了TaKaRa公司的胶纯化试剂盒(Agarose Gel DNA Purifi

免疫亲和柱简介

AOKIN 霉菌毒素免疫亲和柱一.简 介霉菌毒素是由霉菌产生的有毒代谢产物,有较强的致癌性和降低免疫力作用。常见的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素,呕吐素素、单端孢霉烯(T-2毒素)、玉米赤霉烯酮、串珠镰刀菌素、伏马菌毒素等。粮食及饲料很容易受到霉菌毒素的污染,这一问题越来越成为现代农业生产中不

核酸分离与纯化的设计与原则(一)

第一节        核酸分离与纯化的设计与原则细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotei

原代细胞的培养与建系-3

下面为美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)入库细胞的基本要求:   (1)培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态,细胞已传代数等。   (2)冻存液 培养基和保护剂名称。 &

蛋白纯化的首选标签His-tag的优势及应用

His标签蛋白纯化工具-蛋白纯化必备在大肠杆菌和别的原核系统中表达的多组氨酸标签重组蛋白一般运用固定的金属离子亲和色谱来纯化或称为 IMAC. 在这个进程中,支撑物 (一般是珠状琼脂糖凝胶或磁珠颗粒) 用适宜的耦合试剂来进行衍生,比方氨三乙酸 nitrilotriacetic acid (NTA

德国耶拿公司核酸纯化新技术研讨会在京顺利召开

——北京中国农大站   2013年11月27日,德国耶拿公司核酸纯化新技术研讨会农大站在中国农业大学西校区图书馆报告厅如期举行。来自中国农业大学、中国农业科学院、中科院核酸领域的师生近百余人参加了此

基于高压制备液相的多维色谱技术在中药分离纯化中应用

  1 引 言   中药广泛应用于疾病的预防和治疗[1]。快速分离纯化技术对于理解中药复杂的物质基础、控制中药质量和发现潜在活性物质具有重要意义,也是目前中药研究的热点问题之一。作为分析型高效液相色谱系统的延伸,高压制备液相系统能够在保证样品分离度的前提下,大幅度提高载样量,从而快速获得高