WB检测中二抗的选择方法

WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体,选择范围较窄,基本是商品化的,在不考虑二抗修饰类型的前提下,二抗的选择需要遵循以下原则:二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X,选择了鼠抗X一抗,则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗选择要考虑的问题有:①对单抗类一抗,二抗需与一抗的类别或亚类相匹配(多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG抗体,不作考虑)。 一抗类别或亚类 二抗 IgM &......阅读全文

WB检测中二抗的选择方法

WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体,选择范围较窄,基本是商品化的,在不考虑二抗修饰类型的前提下,二抗的选择需要遵循以下原则:二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X,选择了鼠抗X一抗,则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗选择要考虑的问

WB检测中二抗的选择方法

  WB检测之二抗   二抗选择    二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体,选择范围较窄,基本是商品化的,在不考虑二抗修饰类型的前提下,二抗的选择需要遵循以下原则:二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X,选择了鼠抗X一抗,则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二

如何正确选择WB检测的抗体?

WB免疫印迹法,也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting),是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便,主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定,同时也用于未知抗体的检测和单

如何正确选择WB检测的抗体?

WB免疫印迹法,也称免疫转移技术IBT(Immunoblotting),是Towbin将1975年Southern发明的Soutnern blotting技术应用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫学检测方法。其操作简便,主要用于未知蛋白检测及抗原组分、抗原决定簇鉴定,同时也用于未知抗体的

wb二抗怎么融化

wb 二抗融化,wb 抗体用5%的脱脂奶粉或者1%的BSA (千分之一的TBST的溶液 )配置,可以先让抗体和奶粉或者BSA 蛋白非特异结合,这样就不会与PVDF 膜上的蛋白结合了。

elisa检测中二抗时间延长会造成什么影响

  二抗孵育  参考二抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶标记的二抗。  吸尽洗涤液后,立即加入稀释好的二抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后,再加入洗涤液,洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如

elisa检测中二抗时间延长会造成什么影响

  二抗孵育  参考二抗的说明书,按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶标记的二抗。  吸尽洗涤液后,立即加入稀释好的二抗,室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液,在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后,再加入洗涤液,洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如

WB一抗用什么稀释

建议起始浓度1:200开始(当然你也可以1:100,如果你的背景不高的话),倍比稀释,不是再做1:100-1:1000稀释,注意了。其实没有必要分装,一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装,建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下,可以溶解

wb二抗室温几小时

二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。

WB一抗用什么稀释

建议起始浓度1:200开始(当然你也可以1:100,如果你的背景不高的话),倍比稀释,不是再做1:100-1:1000稀释,注意了。其实没有必要分装,一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装,建议原液分装或是10稀释后分装。溶液的浓度取决于溶解在溶剂内的物质的多少。溶解度则是溶剂在特定温度下,可以溶解

wb二抗室温几小时

二抗一般室温就行,没要求要37度,一个小时差不多就够了。蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或

做wb时,一抗和二抗浓度是怎么确定的

一抗的用量和样品中的目标分子含量相关,如果含量较高,就不需要用太多一抗,以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度(义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果),如果样品与厂家的不是一种细胞,可以尝试上下摸索一两个浓度梯度;二抗的用量,和你所在实验室常规的用量就可以,如果出现效果不理想的状态

做wb时,一抗和二抗浓度是怎么确定的

一抗的用量和样品中的目标分子含量相关,如果含量较高,就不需要用太多一抗,以免浪费和条带太亮不易分析。推荐采用厂家的抗体浓度(义翘神州会提供抗体用量、天然细胞株检测结果),如果样品与厂家的不是一种细胞,可以尝试上下摸索一两个浓度梯度;二抗的用量,和你所在实验室常规的用量就可以,如果出现效果不理想的状态

如何选择实验抗体(一抗的选择原理及方法)?

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,在同一个抗体公司,可能会有好几种,甚至好几十种;在不同的抗体公司,那就更多了。那怎样在琳琅满目的抗体中,选择自己实验需要的抗体呢?主要考虑如下几种因素:分析自己实验应用的实验方法是哪种?分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?分析样本中的蛋白质的结构性质

二抗的选择

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC或发光团。

一抗的选择

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素: 分析试验应用的类型l 样本蛋白的结构性质l 样本的种属l 抗体宿主的种类l 抗体的标记和检测l1.分析试验应用的类型   一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于W

梅毒检测方法的选择

1. 国内梅毒血清学试验的传统程序是:先以非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR、TRUST、VDRL等)进行初筛,再以梅毒螺旋体抗原血清试验(如TPPA、TPHA、FTA-ABS等)进行确认。美国、法国和比利时也采用类似的程序。该程序的优点是排除了大多数感染过梅毒但经过充分治疗的病人,从而使临床更易决

食品中二氧化硫的检测方法

食品中二氧化硫的检测方法由于食品基质的差异性,使二氧化硫检测需要不同的方法,且检测原理也各不相同。应用于食品中二氧化硫检测方法有比色法、滴定法和色谱法等。

检测空气中二氧化碳的方法

二氧化碳很早被人们认识,它是一种无色,无嗅的气体。比空气重,其气体密度在标准状况下是1.9659/L。大气中二氧化碳来源于:燃料燃烧,像锅炉、民用炉等以煤、油、柴作燃料燃烧时产生二氧化碳;发动机排气中含有高浓度二氧化碳;生物体呼吸(包括人、动物、植物)产生二氧化碳等。人呼出气中二氧化碳含量高达4%,

抗DNA抗体的检测方法

  目前实验室检测抗DNA抗体的方法主要有放免法、间接免疫荧光法、斑点免疫金渗滤法、免疫印记法和酶联免疫(ELISA)法。各种方法由于抗原来源不同、抗原展现形式不同、实验体系的反应条件不同,检测结果不具可比性。不同方法学检测抗DNA抗体的检测原理、优缺点对比见下表。  综上所述,ELISA方法适合高

做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少

【1】抗体的说明上,都给出了一个范围,可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块,每一块用不同的一抗二抗浓度,这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的:我用的是SANTA CRUZ的抗体,一抗建议的稀释比是1:200-1000,我用的是1:400效果挺好的。周围的人用的

做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少

【1】抗体的说明上,都给出了一个范围,可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块,每一块用不同的一抗二抗浓度,这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的:我用的是SANTA CRUZ的抗体,一抗建议的稀释比是1:200-1000,我用的是1:400效果挺好的。周围的人用的

闪点的检测方法如何选择

   每种油品是测闭口闪点还是测开口闪点要按产品质量指标规定进行。一般地,蒸发性较大的石油产品多测闭口闪点,因为测定开口闪点时,油品受热后所形成的蒸气不断向周围空气扩散,使测得的闪点偏高。对多数润滑油及重质油,由于蒸发性小,则多测开口闪点。    闭口闪点的测定原理是把试样装入油杯中到环状标记处,

欧盟制定食品中二噁英等取样和检测方法

  2017年4月5日,欧盟委员会发布EU 2017/644号法规,制定食品中二噁英、二噁英类多氯联苯(PCBs)和非二噁英类多氯联苯取样和检测方法,并废除EU 589/2014条例。EU 589/2014条例由EU 2017/644号法规的附件I-IV替代,附件I列出定义和缩写,附件II规定了官方

化妆品原料丙二醇中二甘醇检测方法

化妆品原料丙二醇中二甘醇检测方法   1适用范围   本方法规定了化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的气相色谱测定法。   本方法适用于化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的测定。   2方法提要   样品经预处理后,以气相色谱法进行分析,以保留时间定性,以峰面积定量,必要时对阳性结果可采用气相色

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化妆品原料丙二醇中二甘醇检测方法   1适用范围   本方法规定了化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的气相色谱测定法。   本方法适用于化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的测定。   2方法提要   样品经预处理后,以气相色谱法进行分析,以保留时间定性,以峰面积定量

化妆品原料丙二醇中二甘醇检测方法

  化妆品原料丙二醇中二甘醇检测方法  1适用范围  本方法规定了化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的气相色谱测定法。  本方法适用于化妆品原料丙二醇中二甘醇含量的测定。  2方法提要  样品经预处理后,以气相色谱法进行分析,以保留时间定性,以峰面积定量,必要时对阳性结果可采用气相色谱-质谱法进一步确证。

石油液化气中二甲醚检测方法

由于部分液化石油气供应单位在运输和销售液化石油气时,掺混过量二甲醚降低成本。即损害了液化气站的经济利益,同时对消费者人身财产安全构成隐患。二甲醚通常叫甲醚,虽可燃烧(性质和液化气相似)但热值低于液化石油气,对装气钢瓶的橡胶密封圈有溶胀作用。长期充装掺杂二甲醚的液化石油气可能导致钢瓶阀门漏气,产生爆炸

食品中二氧化硫检测方法初探

一、食品二氧化硫检测的必要性二氧化硫在通常状态下是一种无色的有刺激性气味的气体,有毒,易溶于水。并且溶解后和水发生化学反应生成亚硫酸。二氧化硫及亚硫酸盐具有漂白性,它与有色物质发生化合作用生成无色的化合物,但是这种反应是可逆的, 在受热后物质又会变为原来的颜色。由于二氧化硫及亚硫酸盐的S 原子的化合

抗RNP抗体的检测方法介绍

  免疫印迹法:先将ENA抗原经SDS-PAGE组分,再转印至硝酸纤维素薄膜上,将膜条置待测的血清中温育,待测血清中如有抗RNP抗体,将与NC膜上相应抗原条带结合,洗膜后再将膜条置酶标记的抗人IgG中反应,再次洗膜后置酶底物/色原溶液中温育。取出膜条,分析着色条带,与标准条带对比,即可判定抗RNP抗