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双向电泳(twodimensionalelectrophoresis,2DE)6

我们本次实验使用的是银染。银染的方法种类很多,目前有文献报道的就有100多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性pH环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上而显色。 由于银染的灵敏度很高,可染出胶上低于1 ng/蛋白质点,故广泛的用在2D凝胶分析上。待找到自己感兴趣的蛋白质点后,再通过考染富集该目的点,然后做进一步的肽段指纹图谱分析(PMF)或序列测定。随着质谱技术的不断完善和发展,对银染后的f mol级的蛋白质点直接测定已非难事。2.[操作步骤]♥ 固定1) 每条胶用150 mL固定液( 50% 甲醇 和 5% 乙酸)固定20 min。2) 150 mL 50% 甲醇冲洗10 min,3) 去离子水冲洗10min。♥ 敏化4) 150 mL 0.02%硫代硫酸钠敏化1 min。5) 超纯水漂洗2次,每次1min。♥ 银染6) 将胶条浸入 150mL 0.1%硝酸银和 0.08% 甲醛 ......阅读全文

蛋白质组技术的研究进展

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信息仅

常用电泳法

1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。2、纸电

常用电泳法

 1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检

Sapphire双模式多光谱激光成像系统在抗体药研发中的应用

  全球范围内,生物药,尤其是抗体类药物,经过多年的基础研究和技术积累,已经开始迸发其生命力,成为药物领域中最有活力和前景的一个分支。在全球范围已经获批上市的抗体类抗体药至少有80多个,在新冠肺炎抗体药研发中, 现在现已确立了7个抗冠状病毒靶点,同时也是药物筛选靶点。包括:(1) 病毒配体Spike

蛋白质组最新研究进展

  蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。 在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低,并且存在多种非蛋白质成分,如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物,使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切,传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA