蛋白质技术——双向电泳

实验概要蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1000个E.coli蛋白,并表明蛋白质谱不是稳定的,而是随环境而变化. 双向电泳原理简明,第一向进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点;随后,再沿垂直的方向进行分子量的分离. 目前,随着技术的飞速发展,已能分离出10000个斑点(spot). 当双向电泳斑点的全面分析成为现实的时候,蛋白质组的分析变得可行。 样品制备(sample prepareation)和溶解同样事关2-DE的成效,目标是尽可能扩大其溶解度和解聚,以提高分辨率. 用化学法和机械裂解法破碎以尽可能溶解和解聚蛋白,两者联合有协同作用。对IEF(isoelectric focusing)样品的预处理涉及溶解、变性和还原来完全破坏蛋白间的相互作用,并除去如核酸等非蛋......阅读全文

核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳)

(一)DNA的凝胶电泳:凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA ,用于核苷酸多态性的分析。

免疫电泳实验_电泳

试剂、试剂盒Tris-巴比妥缓冲液贮液电极缓冲液琼脂糖溶液实验步骤电泳时温度可控制在 10~15℃,同前述电泳的方法一样,先在冷却板上铺一层煤油,再铺胶。电极芯与凝胶的边缘接触 5~10 mm,并保持平行,电泳时的电场强度约为 20 V/cm。

制备电泳实验——连续电泳

仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖电泳实验步骤1. 连续洗脱电泳使用连续洗脱的聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖电泳能制备微克到毫克级的多肽,蛋白或核酸。装置可以是各种各样的。有的是把样品直接加在固体凝胶的表面,分子经过电泳分离后,由流动的缓冲液洗脱,纯化后的分子被浓缩,并由蠕动泵和部分收集器收集。2. 连

交叉免疫电泳的电泳

一种对样品中各蛋白组分进行定性分析或定量测定的技术。即借助区带电泳使蛋白质抗原分离,继而将含特异性抗体的琼脂糖插入至区带一侧,旋转90。再进行电泳,形成与火箭免疫电泳形状相似的沉淀峰。

火箭免疫电泳的电泳

火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。

2D电泳-电泳流程之-第一向电泳

第一向分离等电聚焦蛋白质是两性分子,在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH,此时蛋白质的静电荷为零,此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时,它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,蛋白分子可能获得或失去

免疫电泳实验_免疫电泳

实验材料待检抗原试剂、试剂盒抗体琼脂巴比妥缓冲液仪器、耗材电泳仪载物玻片打孔器玻璃铸型微量进样器实验步骤1.  取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。2.  按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。3.

电泳仪常用的电泳方法

电泳仪常用的电泳方法  一、凝胶电泳  由区带电泳中派生出的一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式。  凝胶电泳中的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是普通电泳中应用zui多的两种形式。  目前,这种办法被广泛用来分析蛋白质和核酸。  二、醋酸纤维素薄膜电泳  电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、

电泳技术RNA电泳操作步骤

  试剂:  琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。  步骤  一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)  1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。  2. 加700mL

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)一、两块胶电泳和四块胶电泳Mini P-4小型垂直电泳槽 

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

  电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)  一、两块胶电泳和四块胶电泳  Mini P-4小型垂直电泳槽

电泳原理

  基本原理   生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。   1、电解 当电流通过电解电

RNA电泳

·         RNA Gel (Crawford Lab)·         Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis. ·         Northern

RNA电泳

RNA Gel (Crawford Lab)Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis.Northern Gel and  TransferUsing glyoxal

电泳概述

电泳是在溶剂中通过电场转移带电分子,任何带电的离子或者基团放置在电场中都将会迁移。除非在它们的等电点,大多数生物聚合物在任何pH值时都带有净电荷,它们将会以与电荷密度成比例的方式移动。分子在电场中的迁移取决于电场的强度、净电荷、分子的大小和形状、离子强度、粘度和分子移动介质的温度。作为一种分析工具,

RNA-电泳

①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(E直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE ,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。④点样

DNA电泳

DNA电泳(主要内容如下)  Preparation of Agarose Gel and Electrophoresis  Extraction of DNA From Agarose Gel  Extraction of DNA from Acrylamide Gels  DNA Marker 

介电泳

介电泳(Dielectrophoresis)是在外加电场作用下,由于悬浮颗粒与溶剂之间介电常数差异造成的作用力。介电泳作用力会将介电常数小于溶剂的颗粒拉往电场强度较低的地方。另外介电泳力的大小还与颗粒半径有关,所以介电泳常被用来分离大小不同的颗粒或细胞。设计介电泳器件,需要控制电场分布、流场,还要计

电泳分析常用方法凝胶电泳

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,

电泳仪的电泳漕组装技巧

电泳仪的电泳漕组装技巧1.把4只固定的螺杆插进一只贮液框(半上槽)的对应孔洞中,然后将贮液框仰放在桌上。2.用左手拿着凹型槽橡胶模框,并且将右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘,再插到橡胶模框内 ,千万注意手指不可接触到灌胶面的玻璃板。3.把带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上,它的下缘必须与

电泳仪和电泳槽的使用

1、接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止,设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行。 2、首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接,注意极性不要接反。3、工作完毕后,应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头。 4、电泳仪电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小,根据工作

电泳设备及电泳技术应用范围

电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。 电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。 电泳仪(电源):为

制备电泳实验——等电聚焦制备电泳

实验方法原理等电聚焦制备电泳是一种非变性制备技术。由于等电聚焦电泳技术的特点,因而是一种理想的制备方法。试剂、试剂盒电极液两性电解质Ultrodex实验步骤一、液体介质垂直柱状蔗糖密度梯度等电聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制备和分析目的的等电聚焦方法。载体两性电解质在蔗糖密度梯度柱中形成 pH

血红蛋白电泳检查(电泳法)

1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面

电泳设备及电泳技术应用范围

电泳:在直流电场中,带电荷的粒子向带符号相反的电极移动,称为电泳。电泳也是一种分离的方法和技术,就是分离和鉴定混合物中带电粒子(包括离子、高分子多电解质、胶体粒子、病毒颗粒以致活的细胞,如细菌和红细胞等)的技术。   电泳装置:由电泳仪(电源)和电泳槽(混合样品电泳时的支持物)组成。   电泳仪(电

电泳槽使用及凝胶电泳

实验概要电泳技术是分子生物学的基本技术,通过该实验的学习掌握DNA电泳槽使用及凝胶电泳技术。 实验步骤1.   先用胶布将电泳槽的两端封住,防止倒胶后液体漏出,插上梳子,梳子底部与槽底部平行并留有间隙。将凝胶(通常为1%-2%)融化成澄清的液体后(无块状凝胶固体),少冷却加入EB。将胶倒入电泳槽内。

血红蛋白电泳检查(电泳法)

1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面

毛细管电泳芯片自由流电泳

芯片自由流电泳除上述分离模式外,芯片自由流电泳也是芯片电泳分离蛋白质的重要方法。芯片自由流电泳是指在芯片中通过外加电场使样品随缓冲液连续流动的同时沿电场方向进行电迁移,从而按照电泳淌度不同实现分离的电泳分离模式。Raymond等采用芯片自由流电泳模式分离了人血清蛋白、缓激肽和核糖核酸酶A,其分离长度

电泳分析常用方法其他电泳技术

⒈IEF/SDS-PAGE双向电泳法 1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了 IEF/SD S-PAGE双向电泳。其中IEF电泳(管柱状)为**向,SDS-PAGE 为第二向(平板)。在进行**向IEF电泳时,电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP

电泳分离技术--电泳时间过长的原因

 可能由于凝胶缓冲系统和电级缓冲系统地PH选择错误,即缓冲系统地PH和被分离物质的等电点差别太小,或缓冲系统的离子强度太高。