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免疫PCR技术(ImmunoPCR)

免疫PCR技术(Immuno-PCR) 免疫PCR方法(Immuno-PCR)是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术,具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性,使实验中只需数百个抗原分子即可检测,甚至在理论上可检测到1至数个抗原分子。这种灵敏度使免疫检测技术达到了一个新的高度。免疫PCR主要由两个部分组成:*部分是类似于普通酶联免疫吸附实验(ELISA)的抗原抗体反应;第二部分即常规的PCR扩增和电泳检测。其基本过程如下:首先将待检测的抗原吸附于固相,经封闭和冲洗后加入特异的抗体,此抗体常采用生物素标记。经孵育和冲洗后加入作为连接分子的亲和素或叶绿素,再孵育和冲洗加生物素标记的DNA,孵育和冲洗去除游离的DNA分子,然后加PCR扩增系统放大结合于固相的DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测放大的PCR产物。近几年来,科技界陆续提......阅读全文

多重PCR(Multiplex PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

PCR简介/PCR仪

PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制

Troubleshooting for PCR and multiplex PCR

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE

多重PCR(Multiplex PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

重叠PCR—overlap PCR

1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理:变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后,再进行指数扩增的PCR过程。  2、基本原理*步:PCR产生两个或者几个片段,这几个片段之间必须有重叠区。 第二步:以两个片段为例,见上图,*步产生的两个片段,A D链之间有互补,B

普通PCR梯度PCR 原位PCR 荧光定量PCR仪的区别

  普通PCR仪:   一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪,也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如;(ABI 2720)   梯度PCR仪:   一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称

反转录PCR(RT-PCR, Reversed Transcript PCR)

1 原理   RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法,主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶,以随机引物、ol

直接原位PCR(In situ PCR)

原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术,使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞(爬片、甩片或涂片)或组织(石蜡、冰冻切片)上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林;二甲苯;PBS操

反向PCR (inverse-PCR)

利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析,探索邻接已知DNA片段的序列,并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆,建立全长的DNA探针。可用于:(1)基因游走研究;(2)转位因子研究;(3)已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。实验方法原理反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色

反向PCR (inverse-PCR)

            实验方法原理 反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接