脂质体载体用于直接体内基因转染实验
试剂、试剂盒氯仿DC-Chol 储存液DOPEDOTAP胆固醇储存液葡萄糖仪器、耗材透紫外灯玻璃离心管氮气桶真空干燥器水浴超声破碎仪水浴锅挤压机聚碳酸酯膜滤器实验步骤1.用氯仿将 30.0ml 的透紫外灯玻璃管漂洗 3 次。2.混匀用于准备脂质体的在透紫外灯玻璃管中的适当的脂质。（1）对于 DC-Chol/DOPE 的脂质体（摩尔比 3:2)： 加入1.07ml DC-Chol 储存液 和 0.1 ml DOPE 储存液，来回漩涡振荡混匀。（2）对于DOTAP/cholesterol 脂质体（摩尔比为 1:1): 加入 1.0ml DOTAP 储存液和 0.55 ml 胆固醇储存液，来回漩涡振荡混匀。3.用手旋转管子，同时通过沿着管壁吹氮气，蒸发氯仿，形成薄的脂质薄膜。4.在真空干燥器中干燥 2~3 h，使膜完全干燥。为了避免在真空环境下脂质膜的丢失，用铝箔在管口盖住，并在铝箔上面用 26-G1/2 的针戳一些小洞。5.加 2.......阅读全文
脂质体载体用于直接体内基因转染实验
试剂、试剂盒 氯仿 DC-Chol 储存液DOPEDOTAP胆固醇储存液葡萄糖仪器、耗材 透紫外灯玻璃离心管氮气桶真空干燥器水浴超声破碎仪水浴锅挤压机聚碳酸酯膜滤器实验步骤 1.用氯仿将 30.0ml 的透紫外灯玻璃管漂洗 3 次。2.混匀用于准备脂质体的在透紫外灯玻璃管中的适当的脂质。（1）对于
脂质体载体用于直接体内基因转染实验
试剂、试剂盒氯仿DC-Chol 储存液DOPEDOTAP胆固醇储存液葡萄糖仪器、耗材透紫外灯玻璃离心管氮气桶真空干燥器水浴超声破碎仪水浴锅挤压机聚碳酸酯膜滤器实验步骤1.用氯仿将 30.0ml 的透紫外灯玻璃管漂洗 3 次。2.混匀用于准备脂质体的在透紫外灯玻璃管中的适当的脂质。（1）对于 DC-C
脂质体介导的真核细胞转染实验——脂质体进行稳定转染
实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒DMEM仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤1）长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物，转染细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3）。3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液，37℃ 培养箱培养48
细胞转染：脂质体转染的几个实验方法
实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转
痘苗载体转染细胞实验
CaCl2 法 DOTAP 法 实验方法原理 将感兴趣的外源基因亚克隆到质粒转移载体上，外源基因的两端为痘苗病毒基因组非必需基因片段。随后，将重组质
痘苗载体转染细胞实验
实验方法原理 将感兴趣的外源基因亚克隆到质粒转移载体上，外源基因的两端为痘苗病毒基因组非必需基因片段。随后，将重组质粒转染病毒感染的细胞，痘苗病毒基因组与质粒上同源的部分发生同源重组。应用适当的筛选方案，经几轮噬斑纯化，从细胞裂解物中获得重组病毒。实验材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
脂质体介导的细胞转染实验
实验概要学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。实验原理外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂
细胞转染脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性
RNA干扰实验技术介绍（二）
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse III通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。现在多数的研究显示 这种情况通常不会造成影
脂质体介导的真核细胞转染实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM仪器、耗材 培养皿培养箱聚苯乙烯管实验步骤 1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片
脂质体转染的几个实验方法
摘要： 本实验介绍了脂质体转染的几个方法。 实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把 DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-
脂质体转染的几个实验方法
实验概要本实验介绍了脂质体转染的几个方法。实验原理脂质体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先
脂质体介导的真核细胞转染实验
脂质体介导短暂表达 脂质体进行稳定转染 哺乳动物细胞的选择标记 实验材料 哺乳动物细胞
脂质体转染的几个实验方法
实验原理 脂质 体(LR)试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它适用于把DNA 转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转
RNA干扰的详细实验步骤
步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则：(1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究
RNA干扰实验技术介绍
通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer
人体基因治疗的递送途径
与小分子药物不同，大多数基因治疗的分子无法通过自由扩散越过生理屏障进入细胞内部，且面临在血液循环中被降解的问题，因此，递送问题一直以来都是困扰基因治疗临床应用的主要障碍。经过多年的发展，科学家已发展出包括病毒载体、非病毒载体、细胞递送等多种用于人体基因治疗的递送途径。直接递送在早期的研究中，科研人员
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
痘苗载体转染细胞实验——DOTAP－法
实验方法原理将感兴趣的外源基因亚克隆到质粒转移载体上，外源基因的两端为痘苗病毒基因组非必需基因片段。随后，将重组质粒转染病毒感染的细胞，痘苗病毒基因组与质粒上同源的部分发生同源重组。应用适当的筛选方案，经几轮噬斑纯化，从细胞裂解物中获得重组病毒。实验材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
转染和转化的区别
转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。基
转染和转化的区别
转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。基
脂质体转染的定义
脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜。
脂质体转染技术特征
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内，形成DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔也通过直接渗透作用，DNA传递进入细胞，形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放，并进入细胞质中，再进一步进入核内转
细菌与真核细胞的的区别
细菌与真核细胞存在着很大的区别，但也有相同之处。细菌与真核细胞的转染有何异同准确来说，细菌叫“转化”，真核细胞叫“转染”。转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNAinterfere
常用的基因转染技术病毒载体介绍
1、逆转录病毒载体 逆转录病毒为RNA病毒，它们的基因组编码在一条单链RNA上，病毒进入细胞通过逆转录作用，病毒RNA即转变为双链DNA分子，DNA进入细胞核并整合在细胞染色体中，这种整合的病毒称为原病毒。在原病毒的两端各有一长末端重复序列（LTR），LTR内侧还有为复制所必需的其他顺序，包括
RNAi实验原理与方法
RNAi实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（
RNAi的实验原理与方法
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNA
细胞转染的途径与方法
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。细胞转染途径（一） 物理介导：电穿孔法、
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动
常用的分子生物学基本技术（三）
初步应用有关原位PCR技术应用成功的第一篇报道是对感染绵羊中枢神经系统visna病毒在绵羊脉络从一细胞中检查，通过PCR扩增，仅用150碱基对的短探针就可通过ISH检查到了细胞内的visna病毒。从开始在试管内细胞行PCR扩增后再涂片做ISH(原位杂交)检查，已发展到用福尔马林固定、石蜡切片的常规病