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PCR仪常见问题及回答

1. cDNA产量的很低可能的原因:*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大,不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反应起始时RNA的总量及纯度有关*建议在试验中加入对照RNA**链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10*建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于*链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。*目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:a. 将*链的反应温度提高至50℃。b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行*链反应。3. 产生非特异性条带*用RT阴性对照检测是否被基因组DNA......阅读全文

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

浅析微电泳仪应用5大注意事项

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

浅析微电泳仪应用5大注意事项

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

浅析微电泳仪应用5大注意事项

  详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答   PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答

详述Pcr仪的四大分类及常见问题解答PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪

PCR仪常见问题及回答

PCR仪常见问题及回答1. cDNA产量的很低可能的原因:*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大,不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是R

PCR仪常见问题及回答

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对

PCR常见问题及回答

 PCR常见问题及回答 1. cDNA产量的很低 可能的原因:*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大,不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *

降落PCR的原理及常见问题解答

提问:降落PCR(Touchdown PCR)的原理?回答:Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度,直至达到“Touchdown”退火温度,然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法zui初出现是为了避开确定zui佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度

【分享】降落PCR的原理及常见问题解答

提问:降落PCR(Touchdown PCR)的原理?回答:Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度,直至达到“Touchdown”退火温度,然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度之间的任

捕捉生命密码的“利器” 还能测出烤串是否正宗

  诺贝尔奖得主、美国生物化学家凯利·穆利斯不久前去世,他发明的PCR扩增技术,将生物学划分为两个时代:PCR前时代和PCR后时代——  一人声微,万人声振聋发聩。  诺贝尔奖得主、美国生物化学家凯利·穆利斯所发明的PCR技术,正是通过“百万倍复制”的方法让DNA携带的生命密码发出振聋发聩的声音,帮

交大博士血泪自述:不是读博的料,别上博士这条船

  一、前言  原先我是准备等到毕业的那一天,痛痛快快地哭过了之后,一口气写掉这篇文章的。其实一直在零散时间打腹稿,差不多已经煲熟了。刚才有同样读博士读得凄凄惨惨切切的师兄表示期待,于是一横心决定现在就写了。何况,早点让更多还没上博士这条船的弟妹们看到,提醒他们读博要谨慎谨慎再谨慎,能多挽救一个像我

基因表达之RT-PCR之我见

在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题,实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我为什么总是提他们?因为还是很佩服的哦,生怕自己说错了,被他们指出来哦)都谈到了很多,鄙人也充大头答了一些问题,但是还是有各种问题,由于的基因表达还有点实战经验(但也技止此而),所以想些点东西给大家参考,计

PCR Array 常见问题解答

PCR Array FAQ:任何一台能够做QPCR的仪器据能够做PCRarray吗?QPCR 仪器都可以进行QPCR array的实验。根据仪器采用的96孔或者384孔板,分为以下5种板型(plate format):plate formatInstrument providerQPCR instr

TRAP法端粒酶活性检测实验操作方法及疑难解答

Kim应当不会预测到,他在1994年发明的TRAP会那么受欢迎,被一代又一代的研究者奉为端粒酶 活性检测首选方法。不过,TRAP法虽然灵敏度高,却同样存在瑕疵。下面为大家介绍的是根据TRAP法适当改良的研究专用试剂盒具体情况和使用方法以及常见问题解答。本品与通常的端粒 酶活性测定法相比较,具有以下特

PCR仪温控性能及常见问题分析

  PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天小宝来聊一聊定性PCR仪zui为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-------------------------------

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PCR 技术自发明以来已经三十多年,一直广泛应用于分子生物学的各个领域,普通定性PCR在基础研究中仍旧是不可或缺的环节。今天来聊一聊定性PCR仪最为实验人员关注的温控性能和常见问题。一、PCR仪温控性能解读-----------------------------------------------

献给初学者:PCR 常见问题分析

  我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策,还有终极解决方案。  PCR 常见问题及解决方案  1没有扩展条带  可能的原因及对应的解决方案如下:   酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。  

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

 解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题

解答使用荧光定量pcr仪时的常见问题荧光定量pcr仪实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集

2017“DMPK”华山论剑 “质谱沙龙”十一春秋

  分析测试百科网讯 2017年12月9日,北京地区“DMPK&质谱沙龙”联合年会在北京朝阳医院召开,会议由首都医科大学附属北京朝阳医院主办,SCIEX中国、北京质谱医学研究有限公司和分析测试百科网协办。会议的主旨是将DMPK和质谱技术两个主题的内容深入交流,广泛拓展,促进合作和开发,使质谱

梯度PCR仪常见问题及现场解决方案

  梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下:    1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误,这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多,这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶,同时降低循环数。此外,四种dNTP的浓度不同也会出现该问题,此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。    2、PC

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梯度PCR仪常见问题及现场解决方案

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关于全血的保存-DNA提取-pcr个人经验

做了好多DNA提取保存,吃了很多亏给大家点建议吧:(有疑问可以回帖,有时间我会回答如果我知道)。 血液保存: EDTA抗凝最好,肝素也可以不过经常会影响后续试验,一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少,再长时间我也没有试过,注意解冻一次大概损失20%左右(

琼脂糖凝胶电泳的原理及实验过程

实验原理琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分

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