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如何平衡荧光蛋白的发射强度

显示了上面讨论的几个常见问题,多标样品(注意:图 6 中所有荧光团都只显示绿色和红色两种伪彩)经常会妨碍共定位的准确分析。用增强黄色荧光蛋白融合过氧化酶转染人类女性骨肉瘤上皮细胞,目标对象是缩氨酸序列(发绿色荧光),随后用免疫荧光的方法,用二次抗体标记 Alexa Fluor568(发红光),目标对象是过氧化酶膜蛋白( PMP-70),显示在图 6( a)和图 6( d)中。图 6( a)中的背景太黑,致使标记的黄色荧光蛋白强度降低。这种错误使共定位分析发生偏移,对绿色通道中重叠的像素人为产生了较低的检测量。合适的图显示在图 6( d),显示了明显较高的共定位程度。猕猴肾上皮细胞的线粒体网络用 EYFP 和 HcRed1 荧光蛋白(此蛋白含有缩氨酸序列,目标对象是线粒体)转染。成像过程中,非常亮的 EYFP 大大地遮盖了HcRed1 发射的荧光信号,当检测通道的电压、增益和补偿值接近时, HcRed1 发射的荧光信号比 EYFP......阅读全文

DNA Ladder的测定方法是怎么一回事?

  不同细胞不同状态是有不同死法的,具体是细胞凋亡、坏死、还是程序性坏死,需要进一步排查分析来确定。而细胞凋亡是个复杂的过程,针对凋亡时期不同,检测的方法有所不同。那如何去确定哪条途径被触发,在哪个步骤被阻断,以及抑制剂是否能够抑制呢?下面介绍几种常用的测定方法。  一:细胞凋亡的形态学检测  发生

细胞凋亡检测方法

  细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。一、细胞凋亡的形态学检测  根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。  1 光学显微镜和倒

常用细胞凋亡检测方法(图)

一、细胞凋亡的形态学检测1、光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

我们将方案分成三个阶段: 第一阶段介绍蛋白质的制备及蛋白质的荧光染料标记;第二阶段,通过转染或微注射将适当的探针成分导入细胞;第三阶段,图像的收集和分析过程。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料进行转染的细胞株按第二阶段所介绍的方法制备

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

            实验材料 进行转染的细胞株 按第二阶段所介绍的方法制备表达了蛋白质探针的细胞 试剂、试剂盒

检测细胞凋亡的实验方法比较-4

六、Caspase-3活性的检测 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个

1068万!广州中医药大学采购这些仪器

  分析测试百科网讯 近日,广州中医药大学科技创新中心、中药学院公布采购项目,项目预算1068万,涉及超高效液相色谱仪(UPLC)、400MHz核磁共振波谱仪、超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱联用仪、气相色谱质谱联用仪等7台仪器。详情如下:序号采购项目名称采购需求概况预算金额(万元)预计采购时间(填

前列腺原位肿瘤模型的建立实验——原位种植法

前列腺原位肿瘤模型的建立可以:(1)连续活体监测前列腺癌发生、发展;(2)用于前列腺原位肿瘤生长及治疗的研究;(3)研究前列腺癌的生物学行为。实验方法原理10只BALB/C裸鼠前列腺背侧包膜内注入携带红色荧光蛋白(RFP)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)悬液20μL,第2、4、6、8周分别用非侵

组织学研究方法

(一)一般光学显微镜术应用一般光学显微镜(简称光镜)观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块,先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的蛋白质迅速凝固,防止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等,一般常将几种固定剂配制成混

流式细胞仪技术概述

流式细胞仪技术,主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光,经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点,当每个细胞经过焦点时,发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置),光检测器把散射光定量转化成电信号,经数字转换器进行数

流式细胞仪技术概述

流式细胞仪技术,主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光,经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点,当每个细胞经过焦点时,发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置),光检测器把散射光定量转化成电信号,经数字转换器进行数

流式细胞术简介

一、流式细胞术发展简史  流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是:①测量速度快,最快可在1秒种内计测数万个细胞;②可进行多参数测量,可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量,并具有明显的统计学意义;③是一

检测细胞凋亡的实验方法比较-3

◆ 细胞坏死与细胞凋亡细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式,根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别,可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多,下面介绍几种常用的测定方法。 一、细胞凋亡的形态学检测   根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞

荧光显微成像在生物分析中的应用

论文摘自山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南 250014摘 要 荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统可获取显微荧光成像及微区荧光光谱、荧光寿命的测定信息,广泛应用于细胞、组织中蛋白质的结构功能分析,核酸的识别检测,金属离子、自由基的定量测定,以及纳米生物探针的研制等生物分析研究的热点领域。1 引 言

激光扫描共焦显微镜技术及应用(二)

五、激光扫描共焦显微镜技术的应用定位、定量三维重组动态测量¨ 活细胞或组织内游离Ca2+浓度的测量¨ 活细胞内H+浓度( pH值)的测量¨ 自由基的检测¨ 药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 应用:细胞膜电位的测量      荧光漂白恢复(FRA

图解光诱导荧光蛋白系统

GFP蛋白曾经为蛋白质定位等相关研究带来革命性的进展,而随着具有和GFP类似遗传学特征的光学指示剂蛋白的出现,蛋白质相关的动态研究也将获得更多的手段和技术,本文详细介绍了激光诱导荧光系统在蛋白质研究中的应用。 近年来随着蛋白质学研究的进展,研究人员相继发现和特异克隆了一些特殊蛋白质。这些蛋

生物医学研究新工具:FLIM-FRET生物传感器

荧光寿命成像(FLIM)与Förster共振能量转移(FRET)相结合,已被证明非常有利于生物医学研究中各种结构和细胞动态变化的研究。因为FRET信号强烈依赖于FRET配体和受体的距离,所以FRET允许监测分子相互作用。这允许研究分子的相互作用,如配体-受体复合物,蛋白质-蛋白质相互作用、效应蛋白与

FLIM-FRET生物传感器介绍

荧光寿命成像(FLIM)与Förster共振能量转移(FRET)相结合,已被证明非常有利于生物医学研究中各种结构和细胞动态变化的研究。因为FRET信号强烈依赖于FRET配体和受体的距离,所以FRET允许监测分子相互作用。这允许研究分子的相互作用,如配体-受体复合物,蛋白质-蛋白质相互作用、效应蛋白与

浅谈荧光在酶标仪上的应用以及新一代酶标检测系统...一

浅谈荧光在酶标仪上的应用以及新一代酶标检测系统(Paradigm+Tune)的优势前言我们知道目前生命科学及现代分子生物学主要集中在对核酸和蛋白质等生物大分子的分析以及进行一些细胞水平的研究。传统的分析方法是采用放射性同位素作为一种示踪剂,标记在各种生物大分子或者细胞中来研究它们之间的相互作用和变化

共聚焦显微镜使用技巧与心得(一)之 荧光原理篇

工欲善其事必先利其器,想用好共聚焦显微镜光会用操作可不行,那永远不可能成为“共聚焦达人”,要想成为“达人“必先懂得原理,好吧,开始啦。什么是荧光?荧光:荧光现象是物质在光的照射下所产生的发光现象。首先荧光是一种光致发光现象,荧光物质必须是在光的照射下才能发光。否则就是其他的发光现象而不是荧光。例如夜

新型碳量子点荧光探针或将问世 细胞钙离子检测迎利好

  钙离子调节多种重要的细胞功能  钙是维持生物体生命活动的必需元素之一,在骨骼生长、肌肉活动、酸碱平衡、神经活动中起着不可替代的作用。  正常状态下,一位健康成年人体内平均钙含量为1500g,大约占其体重的1.5-2%。绝大部分人体钙存在于骨骼和牙齿中,剩下的部分存在于软组织和体液中。作为通用的第

186项医疗器械行业标准已出炉(附名单)

  4月29日,CFDA发布公告,又有93项医疗器械行业标准已经审定通过,现予以公布。这93项行标包括:强制性标准28项,推荐性标准65项。  加上今年2月1日公布的93项行标和1项修改单,今年CFDA已经颁布了两批共186项医疗器械行业标准。其中强制性标准42项,推荐性标准144项,还有YY 04

钙离子荧光探针类型大盘点

钙离子在许多生理过程中起着复杂的作用。例如,细胞内钙离子在促进神经元从神经元中释放神经递质的信号转导途径中必不可少,并参与所有肌肉细胞收缩所需的机制。细胞离子浓度受被动和主动离子通道和泵的调节。离子通道和泵的故障可能导致离子浓度调节不当,从而产生不利于正常细胞功能的不利条件。钙离子浓度研究领域中常使

荧光标记基团的选择及其在荧光定量PCR中的应用

PCR实验室产品选择指南 荧光  基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波,可以作为抗体等分子的标记物,实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。 荧光基团 吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光

生物发光技术在生命科学中的应用(一)

随着发光(luminescence)技术在多种生物实验中的广泛应用,生物发光(bioluminescence)技术越来越成为首选的生物检测手段。在这篇文章中,我们将详细讨论生物发光技术在生物检测中的应用,以及它与其它发光检测手段相比所显示出的优点。1 生物发光的特点根据产生光子的能量来源不同,发光可

流式细胞术常见问题问答

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免

偶然找到流式细胞术常见问题问答,经典!

1、流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?FL2-W是只检测荧光的脉冲宽度, FL2-H是指脉冲高度。通常在做细胞周期分析时应用,用于去除粘连细胞。2、流式同型对照怎样选择?同型对照(Isotype Control):使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立实验——外科原位移植法

人肺癌裸鼠原位移植模型的建立可用于:(1)建立一个良好的肺癌动物实验研究平台;(2)实时监测原发肿瘤的生长和转移;(3)在细胞和分子水平对活体内的生理和病理过程进行定性或定量可视化观察。实验方法原理利用逆转录病毒转染法将增强型绿色荧光蛋白基因导入人肺癌大细胞系NCI-H460,采用外科原位移植法建立

基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂实验

基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂             实验材料 PRSETB 细菌表达质粒

基于钙调素与荧光蛋白融合的钙指示剂实验

钙调素(CaM) 是普遍分布的蛋白质,参与钙介入的信号转导。当 Ca2+ 流入时,CaM 获得强亲和力,结合各种带有一个或多个CaM 识别序列的胞内蛋白,启动或终止 Ca2+ 调控的信号串联。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料PRSETB 细菌表达质