WesternBlot的过程与优化,着重于化学发光检测3
六、使用化学发光底物的印迹法和操作规程的优化6.1 使 用 化 学 发 光 底 物 的 蛋 白 质 印 迹 法(1) 凝胶电泳分离蛋白质样品。(2) 制备转移缓冲液。采 用 4 〇 0 m L 超 纯 水 制 备 Tris— 甘氨酸转移缓冲液,再加人IOOmL 甲醇。 4°C 下 使 用 和 保 存 该 转 移 缓 冲 液 。注 : 转 移 缓 冲 液 : 25 mm 〇 I/LTris、192 mmol,L 甘氨酸 (pH8_ 0),2 0 % 甲醇。(3) 为湿转移制作凝胶「三明治」(图 33.8)。对于半干的转移,在阴极和阳极间按同样的步骤制作三明治。, : 在三明治装配前将衬垫和滤纸浸泡在转移缓冲液中。⑷将蛋白质从滅胶转移到膜上。湿转移时如果使用为 g cmX1 〇 c m 凝设计的迷你转移装置,则 40 V 转 移 90min, 并保持缓冲液温度为4 ℃ 。半干型转移时,15 v 转移90 min。注: 通过凝胶染色或......阅读全文
Western Blotting
实验概要Western Blot (AP)主要试剂1. Membrane Blocking buffer:5% Milk 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA
Western杂交
Western杂交l 组织印迹的Western杂交在硝酸纤维素膜上制备组织印迹1.在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸,在滤纸上方放上一张普通纸,然后铺上一层硝酸纤维素膜。2.用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片(厚度约为1mm)。如果组织表面是湿的,则在Kimwipes纸上
Western杂交
实验概要本实验介绍了Western杂交的基本流程。主要试剂液氮,提取缓冲液(1 x PBS,10ug/mL Leupeptin,1 mM PMSF,5 mMBenzamidine. 2mM EDTA),转移缓冲液(39mM Glycine,48mM Tris,0.037% SDS,20%甲醇),
Western Blotting
1. Optional: "Renature" gel- this is thought to permit some refolding of proteins and may be important in finding epitope recognition of monoclonal an
Western 杂交
Western 杂交(主要内容如下)Preparing of Protein LysatesWestern BlottingFar Western BlottingSemi Dry BlottingStripping MembranesTrouble Shooting and OthersPrepa
Western杂交
实验概要本实验介绍了Western杂交的基本流程。主要试剂液氮,提取缓冲液(1 x PBS,10ug/mL Leupeptin,1 mM PMSF,5 mMBenzamidine. 2mM EDTA),转移缓冲液(39mM Glycine,48mM Tris,0.037% SDS,20%甲醇),
Smolke:Protocols/Western
Overview Blotting for large V5-tagged proteins in S. cerevisiae Materials Y-PER (Pierce) Halt EDTA-free Protease Inhibitor (Pierce) NuPA
Silver: Lysate for Western
Grow cellsHarvestSpin downWash with PBSSpin down enough cells to collect a 50-100 µL cell pellet in a FastPrep tubePrepare lysis buffer (beforehand) a
western 是什么
向西的;自西的;西洋的;北美及南美的;西部的人;西欧人;西部片;西方的
Western Blotting Protocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs.