扫描电子显微镜（SEM）之样品制备篇
一、样品处理的要求 扫描电子显微镜的优势为可以直接观察非常粗糙的样品表面，参差起伏的材料原始断口。但其劣势为样品必须在真空环境下观察，因此对样品有一些特殊要求,笼统的讲：干燥，无油，导电。 1 形貌形态，必须耐高真空。 例如有些含水量很大的细胞，在真空中很快被抽干水分，细胞的形态也发生了改变，无法对各类型细胞进行区分； 2 样品表面不能含有有机油脂类污染物。 油污在电子束作用下极端容易分解成碳氢化物，对真空环境造成极大污染。样品表面细节被碳氢化合物遮盖；碳氢化合物降低了成像信号产量；碳氢化合物吸附在电子束光路引起极大象散；碳氢化合物被吸附在探测器晶体表面，降低探测器效率。对低加速电压的电子束干扰严重。 3 样品必须为干燥。 水蒸气会加速电子枪阴极材料的挥发，从而极大降低灯丝寿命；水蒸气会散射电子束，增加电子束能量分散，从而增大色差，降低分辨能力。 4 样品表面必需导电。 在大多数情况下，初级电子束电荷数量都......阅读全文
扫描电子显微镜样品要求及制备－(一)－－常规样品制备
样品制备对扫描电镜观察来说也至关重要，样品如果制备不好可能会对观察效果有重大影响。通常希望观察的样品有尽可能好的导电性，否则会引起荷电现象，导致电镜无法进行正常观察；另外样品还需要有较好的导热性，否则轰击点位置温度升高，使得试样中的低熔点组分挥发，形成辐照损伤，影响真实的形貌观察。如果要进行EDS/
扫描电子显微镜样品制备技术
扫描电子显微镜样品制备技术(preparationof specimens for scanning electron microscopy):扫描电子显微镜以观察样品的表面形态为主，因此扫描电子显微镜样品的制备，必须满足以下要求:①保持完好的组织和细胞形态;③充分暴露要观察的部位;③良好的导电性和
扫描电子显微镜样品制备实验
实验方法原理1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能最大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水，也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。2. 目前采用最多、效果最好的方法
扫描电子显微镜样品制备实验
实验方法原理 1. 生物样品的精细结构易遭破坏。因此在进行制样处理和进行电镜观察前必需进行固定。以使其能最大限度地保持其生活时的形态。而采用水溶性、低表面张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水，也是为了在对样品进行干燥处理时尽量减少由表面张力引起的其自然形态的变化。2. 目前采用最多、效果
扫描电子显微镜的样品制备
由于样品台的限制，SEM样品必须足够小，同时可能需要特殊的预处理来增加样品的电导率和稳定性，以便样品能够承受高真空条件和高能电子束的轰击。通常使用导电胶将样品牢固地安装在样品台或短柱上。SEM被广泛用于半导体晶片的缺陷分析，制造商制造出可以检查尺寸为300 mm的半导体晶片的任何部位的仪器。许多
扫描电子显微镜样品制备技术的化学方法制备样品
化学方法制备样品的程序通常是：清洗→化学固定→干燥→喷镀金属。 为了观察脏器或细胞内部结构，可切断冷冻样品，再经化学固定、导电染色、脱水和临界点干燥及喷镀金属，用扫描电镜观察割断表面暴露出的内部结构。冷冻割断又包括乙醇割断法、二甲基亚砜割断法及冷冻断裂法等多种。用冷冻割断法可获得高分辨的组织细胞内部
扫描电子显微镜样品的制备技术
化学方法制备样品 编辑 化学方法制备样品的程序通常是：清洗→化学固定→干燥→喷镀金属。 清洗 某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物，掩盖着要观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用5%碳酸钠冲洗或酶消化
扫描电子显微镜块状样品制备方法
3.1.1 块状试样制备 1．导电性材料 导电性材料主要是指金属，一些矿物和半导体材料也具有一定的导电性。这类材料的试样制备最为简单。只要使试样大小不得超过仪器规定（如试样直径最大为φ25mm，最厚不超过20mm等），然后用双面胶带粘在载物盘，再用导电银浆连通试样与载物盘（以确
扫描电子显微镜（SEM）样品制备详解
一、样品处理的要求扫描电子显微镜的优势为可以直接观察非常粗糙的样品表面，参差起伏的材料原始断口。但其劣势为样品必须在真空环境下观察，因此对样品有一些特殊要求,笼统的讲：干燥，无油，导电。1、形貌形态，必须耐高真空。例如有些含水量很大的细胞，在真空中很快被抽干水分，细胞的形态也发生了改变，无法对各类型
扫描电子显微镜（SEM）之样品制备篇
一、样品处理的要求 扫描电子显微镜的优势为可以直接观察非常粗糙的样品表面，参差起伏的材料原始断口。但其劣势为样品必须在真空环境下观察，因此对样品有一些特殊要求,笼统的讲：干燥，无油，导电。 1 形貌形态，必须耐高真空。 例如有些含水量很大的细胞，在真空中很快被抽干水分，细胞的形态也发生了改
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十五）
切片虽然尚未看出切片对分析结果的影响，但一些因素仍须予以考虑：刀在切割样品时会逐渐磨损，应考虑在切片过程中刀刃材料消失到什么地方去了。金刚刀是纯碳制成的极硬，一般不大会对样品造成大污染，但玻璃刀含有硼、硅、钾以及其它微量元素，必须给予注意。另外，切片时使用的液槽及其槽液，必须十分注意保持清洁。最
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十八）
1.有一干燥室，包括一个冷冻台，保持足够低的温度，同以防止冰晶的生长或再生，有充气装置，以让干燥氮气进入干燥室;2.有一个真空系统，以保持干燥室的压力在10-100mPa之间，这通常用扩散泵和机械泵来达到;3.有一个水蒸汽吸附阱，使固体界面附近有很高的水蒸汽梯度，以提高干燥速度，最好的办法是装一个液
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（九）
X射线微区分析的生物样品制备扫描电镜除了应用二次电子像研究样品表面形貌的主要用途外，另一个主要用途是应用特征X射线对样品进行微区成份分析。生物样品的X射线微区分析，是为了检测和测量生物基质中的元素在细胞、微粒甚至生物大分子的分布情况。其中，按其难易程度可分为定性分析和定量分析两类。定性分析的目的是断
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（五）
组织导电法组织导电法是利用某些金属盐溶液对生物体中的蛋白质、脂肪类及淀粉等成分的结合作用，使样品表面离子化或产生导电性能好的金属化合物，从而提高样品耐受电子束轰击的能力和导电率。这种方法近年来国内外均有不少报道。此法的基本处理过程，是将经过固定洗净的样品，用特殊的试剂处理后即可观察，具体程序见图10
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十）
此，用干X射线微区分析的生物样品，应该满足以下要求：样品的正常结构应能完好地保存;必须了解样品中损失或者获得的物质的化学成份及其数量;必须知道样品中元素的重新分布和位移;样品制备所用的化学药品不应掩盖被分析的元素。完全满足上述要求是困难的，只能设法尽可能地接近。由于生物材料的类型各式各样，如有块状样
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十六）
染色和镀膜染色过程与固定过程对成份分析的影响是相似的，都存在可溶性元素损失和引入重元素的危险，这些重元素的X射线会掩盖或干扰被分析的元素。因此，关于固定的讨论也适合于染色的过程。最好是不要进行染色。如果样品图像反差太弱无法识别，尽可能先用其他办法解决，实在非染色不可时，必须十分小心。为了防止样品局部
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（二）
样品的表面导电处理生物样品和其他非金属样品的表面电阻率很高，在电镜观察时，往往容易发生荷电现象。另外，生物样品都是由低原子序数的碳、氢、氧、氮等元素组成，二次电子的发射率很低，信号弱，难以获得必要的图像反差。因此，为了消除或减少以上不良现象的产生，生物样品和非导电的样品在扫描电镜观察前，均需进行表
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（三）
为了取得上述效果，所镀的金属膜应符合以下要求：金属膜尽可能保持均匀的厚度，膜本身没有结构，或者是微细到难以看出的程度。膜要薄，不会掩盖样品表面原来的细微结构。二次电子发射率好。膜本身不因电子轰击而发生变化，在大气中保存样品不易变性(即化学稳定性好)。根据上述要求，多采用金、钯、铂和金一钯、铂一钯及铂
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（八）
碘化钾一醋酸铅导电法:(A)碘化钾 20g碘 0.2g蒸馏水 l00ml(B)氢氧化钾 4.08醋酸铅 1.28蒸馏水加至 l00ml用时再稀释(1份母液+3份蒸馏水)，值得注意的是：由于醋酸铅与空气接触易产生沉淀，故用前应经过滤。其处理操作流程见图10-11所示。单宁酸导电法:单宁酸也称鞣酸，它
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（七）
用于组织导电的处理液应具备下列条件：能对组织起染色作用;组织结构保存完好;不会污染样品;不掩盖微细结构;
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十一）
室温制备方法制备切片样品方法的步骤与通常超薄切片法的步骤相似，也经过取样、清洗、固定、脱水、包埋、切片和染色等步骤。然而，由于对样品的要求两者有较大差异，在每个步骤的做法和要求也就不大相同。下面我们简单讨论一下; 取样和清洗一般情况下，应尽快地从实验的机体上得到所需的组织切块。缺氧、受力和死后变化，
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十四）
包埋为了切片.经过固定和脱水的生物组织需用树脂渗透和包埋.这会给X射线的分析带来影响;由：由于渗透，样品的质量增加.树脂将会稀释细胞的成份;树脂会抽提元素并使其重新分布;包埋过程必然会给被分析的组织增加元素。如某些环氧树脂含硫量相当高，而以环氧丙烷为基的环氧树脂含少量的氯。甚至使用含氯量极低的ERL
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍一
品的装台粘胶将样品装固在样品台上，最好采用导电胶。常用的导电胶有两种：一种是银粉导电胶，这是一种将很细的银粉拌在低电阻树脂液内制成的胶水，使用较为方便，这种树脂的绝缘电阻低，干后的电阻率仅为0.02Ω/mm，并可以被溶剂溶解还原,也有其它产品的银粉导电胶。另一种是将石墨粉拌在低电阻树脂液内的碳导电胶
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（四）
离子溅射与真空镀膜比较，它具有以下优点：粒子细，岛状结构少，约只有同一厚度的真空镀膜的1/5～1/10，膜层均匀。对于凹凸不平较大的样品，也能形成很好的金属膜。在膜的平均厚度一样时，溅射镀膜比真空镀膜的二次电子获得量大得多，故溅射镀膜的厚度可薄一些，所以能节省贵重金属用量。所需真空度低，操作较容易，
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十七）
低温制备方法利用低温技术处理样品时，上述在室温制样过程中出现的许多问题都会大大减少。冷冻生物技术在生物样品的X射线分析研究中越来越重要，它大概是人们可望分析可溶性离子和元素的唯一途径。冷冻固定完全是个物理过程，能够显著地提高某些软生物组织的机械强度，水从液体转变为固体，抑制了生理过程，而且最大限度
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十二）
固定由Yorm，Holbrook等人的研究表明：所有的固定方法，对组织中的元素自然分布都有一些影响。冷冻生物学技术对于组织里的电解质浓度影响最小，而湿的化学方法的影响最严重。所有的固定剂对未结合的元素和结合的元素都存在有害影响。常用的有机醛类会使细胞中的可溶性物质大量损失，如果要使用醛类作固定剂，则
扫描电子显微镜生物样品制备技术详细介绍（十三）
脱水细胞和组织经过化学固定后，再经化学脱水，无疑会增加其中扩散物质的损失。乙醇、丙酮作脱水剂的影响，虽然未作严格的对比研究，但是似乎其差别不大.都是不太理想的脱水剂。对用于X射线微区成份分析的理想脱水剂尚未找到。改善的办法有：用二甲氧基丙烷作脱水剂，Thorpe和Harvey用植物材料作试验.对比二
透射和扫描电子显微镜样品的制备及观察
实验概要本实验详细介绍了透射和扫描电子显微镜样品的制备及观察。主要试剂醋酸戊脂，浓硫酸，无水乙醇，无菌水，2%磷钨酸钠（pH6.5-8.0）水溶液，0.3%聚乙烯甲醛（溶于三氯甲烷）溶液，细胞色素c，醋酸铵，质粒pBR322。主要设备普通光学显微镜，铜网，瓷漏斗，烧杯，平皿，无菌滴管，无菌镊子，大头
透射和扫描电子显微镜样品的制备及观察
实验概要本实验详细介绍了透射和扫描电子显微镜样品的制备及观察。主要试剂醋酸戊脂，浓硫酸，无水乙醇，无菌水，2%磷钨酸钠（pH6.5-8.0）水溶液，0.3%聚乙烯甲醛（溶于三氯甲烷）溶液，细胞色素c，醋酸铵，质粒pBR322。主要设备普通光学显微镜，铜网，瓷漏斗，烧杯，平皿，无菌滴管，无菌镊子，大头
电子显微镜使用实验_扫描电子显微镜的生物样品制备
实验方法原理扫描电镜观察时要求样品必需干燥，并且表面能够导电。因此，在进行扫描电镜生物样品制备时一般都需采用固定，脱水，干燥及表面镀金等处理步骤。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒二氧化碳戊二醛磷酸缓冲液乙醇仪器、耗材真空镀膜机扫描电子显微镜临界点干燥器冰箱盖玻片载玻片实验步骤一、固定及脱水生物样品的精细