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用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验

实验方法原理 空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验,是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感染单位的浓度。病毒空斑(又叫蚀斑)如同噬菌体的噬斑,一个空斑为一个病毒体的繁殖后代品系。在细胞培养中做空斑是一种较精确地测定病毒感染力的方法,将病毒各稀释度种入单层细胞瓶,吸附1 h 后,在单层细胞上覆以营养琼脂培养基,病毒在细胞中繁殖使细胞死亡。但由于琼脂的限制只能感染邻近的细胞,形成「空斑」的退化细胞区,经中性红活细胞染料着色后,活细胞显红色,而空斑区细胞已退化不着色,形成不染色区域。凡是能在细胞培养物中产生细胞病变效应 (Cytopathic Effect, CPE) 的病毒都可采用空斑技术来测定其滴度。实验材料&n......阅读全文

重组病毒的蛋白质分析实验

实验材料 Sf细胞试剂、试剂盒 胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材 培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤 1.  接种2.5×108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中,27℃温育≥ 2 h。从

重组病毒的蛋白质分析实验

实验材料Sf细胞试剂、试剂盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液仪器、耗材培养瓶培养箱离心机转子水浴锅实验步骤1.  接种2.5x108 Sf9细胞于含5 ml 完全培养液/10%胎牛血清的25 cm2 培养瓶中,27℃温育≥2 h。从含无血清完全培养液和重组蚀斑

重组杆状病毒的纯化实验

实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1.  制备病毒上清的系列稀释液,该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。

用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验_蚀斑试验法

实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验,是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合,当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时,会造成细胞被溶解而形成空斑,每个空斑系由一个病毒颗粒所造成,计算空斑数目再乘以稀释倍数,即可得知原来的病毒感染单位

重组杆状病毒的纯化实验——编码β-半乳糖苷酶

杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒,可用于(1)作为基因工程病毒杀虫剂 ,提高害虫防治效率(2)作为超高效的真核基因表达载体 ,生产有用的工程蛋白(3)研究杆状病毒基因组的结构与功能(4)研究真核基因表达的调控机制。实验方法原理由于昆虫杆状病毒环状双链DNA基因组很大 (约 13