DNA酶I足迹法对DNA上的蛋白质结合位点作图实验
本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议，请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I变性聚丙烯酰胺测序胶poly(dI-dC)测序胶长度标准品32P 末端标记的 DNA仪器、耗材Beckman SW28 转头或类似产品Sorvall Hl000B 转头或类似产品沸腾的水浴锅带 B 型研......阅读全文
DNA酶I足迹分析法
实验方法原理 实验材料 含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒 适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol
DNA酶足迹法的原理介绍
DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解，在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区)，从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后，又可测出被结合处DNA的序列。
DNA酶足迹法的功能介绍
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。
DNA酶I足迹分析法实验——粗制品的DNA酶足迹分析法
实验方法原理DNA酶足迹分析常用来寻找粗制品中的蛋白质，因而提供了一种在纯化过程中采用的分析方法。通过改变条件，如在反应体系中加入大量的竞争性DNA，或增加反应中盐的浓度，可抑制非特异性的DNA结合蛋白结合到标记的DNA上。实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶10
DNA酶I足迹分析法实验——NA酶I足迹分析法
本分析方法用来检测DNA上特异的蛋白质结合位点。位点上结合的蛋白质可保护 D N A 的 磷 酸 二 酯 键 骨 架 免 于 受 D N A 酶 I 催 化 的 水 解 。 水 解 后 D N A 片 段 在 变 性DNA测序胶上分离，通过放射自显影可使结合位点显示出来。足迹法已进一步发展成为确定D
DNA酶I足迹分析法实验
DNA酶I足迹分析法 用光密度及数值分析法决定蛋白质结合的平衡常数 粗制品的DNA酶足迹分析法 实验方法原理
DNA酶足迹法的原理和应用
DNA酶足迹法是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。其原理为：DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解，在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区)，从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移
DNA足迹法介绍
DNA足迹法，中文名称：DNA足迹法英文名称：DNA footprinting定义：检测DNA序列中DNA结合蛋白识别部位的一种方法。
DNA酶I足迹分析法实验2
实验材料含有DNA结合位点的质粒DNA试剂、试剂盒适当的限制性内切核酸酶100%乙醇及冰冷的70%乙醇TE缓冲液[α-32P] dNTP (3000〜6000 Ci mmol)水溶液1O× Klenow片段缓冲液E. coli DNA聚合酶1的Klenow片段5 mmol L 4dNTP 混合液脱氧
DNA酶足迹法的基本原理
原理为：DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解，在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区)，从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸对数目。在用酶移出与蛋白质结合的DNA后，又可测出被结合处DNA的序列。
DNA－酶－I－足迹分析实验
试剂、试剂盒32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液Z'(或缓冲液 Ze）DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚/
DNA－酶－I－足迹分析实验
试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针酚 氯仿乙醇聚乙烯醇竞争 DNA 缓冲液 Z'(或缓冲液 Ze）DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 终止液蛋白酶 K甲酰胺加样缓冲液实验步骤 材料32P-标记 DNA 酶 I 足迹探
DNA－酶－I－足迹分析实验
DNA 酶 I 足迹分析实验 试剂、试剂盒 32P-标记 DNA 酶 I 足迹探针 酚 氯仿
DNA足迹法的原理介绍
DNA被蛋白质结合后，由于蛋白质的构象保护，DNaseI不能降解这一结合位点，如果对该DNA进行一端的末端标记，并控制好DNaseI的酶量和作用时间，可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解，这段区域到标记末端的片断是缺失的，对其电泳，可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
DNA足迹法的基本原理
原理：DNA被蛋白质结合后，由于蛋白质的构象保护，DNaseI不能降解这一结合位点，如果对该DNA进行一端的末端标记，并控制好DNaseI的酶量和作用时间，可将该DNA切割成大小不等的DNA片断而蛋白质保护区域不被酶解，这段区域到标记末端的片断是缺失的，对其电泳，可找出蛋白质结合位点的精确位置。
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分试剂、试剂盒 细胞匀浆缓冲液细胞重悬缓冲液细胞淋洗缓冲液乙醇Ficoll 400甲酰胺染色液MgCl2 CaCl2 溶液NaClNonidetP-40酚：氯仿磷酸盐缓冲液聚乙烯醇终止液组织匀浆液组织重悬缓冲液台盼蓝染料DNA 酶 I
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验 实验材料 新鲜组织、培养的细胞、来自细胞或组织的蛋白成分
DNA－酶－I－足迹法对－DNA－上的蛋白质结合位点作图实验
本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议，请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）
足迹法
High Resolution Genetic Footprinting (Stanford)Genetic footprinting is a technique for high-resolution mapping of the functional organization of a clo
足迹法(Footprinting)
Footprinting Procedures· DNase I Footprinting (Mike A. Dyer)· DNase I footprintingDetermining the site of binding for a protein on a D
RNA足迹法的定义
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后，用RNA酶清除未被结合的部分，再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二
RNA足迹法的原理和应用
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后，用RNA酶清除未被结合的部分，再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二
RNA足迹法的基本概念
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后，用RNA酶清除未被结合的部分，再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二
首个酶法检测DNA中dU碱基技术诞生
单碱基水平精确定位dU在DNA乃至基因组位置示意图 迄今为止，人类还无法从单个碱基分辨率水平上检测到脱氧尿嘧啶（dU），这成为DNA序列检测的盲区和瓶颈之一，严重阻碍了对dU功能的认知和对DNA遗传密码的理解。 1月17日，中科院院士、同济大学教授陈义汉课题组和同济
可以DNA结合的酶DNA连接酶
DNA连接酶：是能够使用来自ATP或NAD的化学能将先前切割或断裂的DNA链聚集在一起的酶。连接酶在DNA滞后链复制中特别重要，因为它们将冈崎碎片组合成DNA链。连接酶在DNA修复和基因重组中也发挥重要作用。
DNA酶切
一、 DNA酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶液集中在
DNA酶切
一、 DNA酶切反应 1、 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶液,用手指轻弹管壁使溶液混匀,也可用微量离心机甩一下,使溶