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染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点

染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体的特异性反应,可以真实地反映体内蛋白分子与基因组DNA结合的状况。下面我们就最基本的实验步骤,实验中的小技巧以及需要注意的问题简单介绍一下。1. 细胞固定甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质,蛋白质-DNA,蛋白质-RNA交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。交联所用的甲醛终浓度为1%,交联时间通常为5分钟到1个小时。需注意的是,交联时间如果过长,细胞染色质难以用超声波破碎,影响ChIP结果,而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短,则交联不完全,产生假阴性。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。2. 染色质片段化交联后的染色质需被超声波切成400~600 bp的片段,以便目的蛋白的暴露,利于抗体识别,其片段破碎的均匀一致性对结果影响至关重要。传统的超声波破碎......阅读全文

ChIP-Chip技术的介绍与应用

人类基因组计划的完成开启了一个新的纪元——功能基因组时代来临,与基因信息相比较,人们更关注于基因的功能、调控网络与信号通路等信息。表观遗传学研究与核内蛋白因子的功能分析成为基因表达调控研究的重要组成部分。结合了染色质免疫共沉淀与基因芯片技术的ChIP-chip技术的浮现使得全基因组范围内DNA与蛋白