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彩色免疫金银染色的原理及操作步骤

实验概要本文介绍了彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）的原理及操作步骤。实验原理彩色免疫金银染色方法（coloured IGSS，CIGSS）基本原理是在IGSS法的基础上，根据洗彩色照片的显影原理而发展起来的，即IGSS后，在抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的氧化反应，将银颗粒氧化成溴化银，后者与彩色显影剂起还原反应，生成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由五色变成有色的染料，并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，不会发生非特异性背景染色。实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水。2. 0.1%胰蛋白酶37℃消化20min，或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。3. 0.05mol/L（pH7，4）TBS洗3×3min。4. 1%EA（卵蛋白）15min，不洗。5. 适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20......阅读全文