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猴胚胎干细胞的分离及建系

实验概要猴胚胎干细胞(monkey Embryonic Stem Cells,monESCs)的分离及建系主要试剂重组人卵泡刺激素(recombinant human Follicle Stimulating Hormone,rhFSH)、hCG、豚鼠补体、抗猴全血清、TL-HEPES、0.5 mg/mL的透明质酸酶电激活液、细胞基础培养液、0.5%链蛋白酶、2 mM 6-DMAP的CMRL-1066培养液、卵母细胞成熟液HECM-9培养液、monES培养液、复方氯胺酮主要设备注射器、35 mm培养皿、100 mm培养皿、巴斯德管、4孔培养板、内窥镜、负压泵、体视镜、电融合仪、超声影像工作台实验材料成年恒河猴或食蟹猴胚胎!注意:严格按非人灵长类动物实验规范操作,符合非人灵长类动物实验伦理学要求,尽量减少动物的使用数量,尽量避免动物的损伤。实验步骤(1)促排卵①按照已报道的促排卵操作流程,为生理周期第1-4天正常的成年......阅读全文

monESCs传代、冻存及复苏

实验概要monESCs传代、冻存及复苏主要试剂DMEM/F12培养液、monESCs培养液、冻存液C、1 mg/mL胶原酶Ⅳ主要设备15 mL离心管,5 mL、10 mL移液管,冻存管、6孔培养板、倒置显微镜实验步骤传代前一天首先准备好MEF饲养层细胞,饲养层细胞要求密度为1.2×104~1.5×1