RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义：说到基因表达，是指RNA，还是蛋白？是指mRNA还是包括风头正旺的非编码RNA？mRNA还有不翻译的RNA呢。应该说转录水平指的是RNA水平，而蛋白应该叫翻译水平？我们这里就特指编码蛋白的mRNA的量的检测吧！ 方法：很多很多，我们常用的也就是RT-PCR和northern。RNA没保护分析在国外很常用，也有半定量的功能，一次性试剂盒还能以此将一个表达簇一起分析，例如NFkB的转录激活谱中的8个常见基因。dot blot的最大贡献是发展到了反向dot blot的顶峰――曾经无限时髦的基因芯片，而原位杂交的放大效应......阅读全文
RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义
基因表达－RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。基因表达的定义
基因表达之RTPCR之我见
在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题，实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我为什么总是提他们？因为还是很佩服的哦，生怕自己说错了，被他们指出来哦）都谈到了很多，鄙人也充大头答了一些问题，但是还是有各种问题，由于的基因表达还有点实战经验（但也技止此而），所以想些点东西给大家参考，计
异型淋巴细胞之我见
在临床工作中常见到某些患者的标本，血液分析仪结果显示单核细胞或淋巴细胞比例升高，但手工推片后发现是不规则形异型淋巴细胞（简称异淋）。对于异淋与单核细胞、正常淋巴细胞和幼稚细胞的鉴别有时并不容易。针对这个问题，我们总结了一些小经验，和大家一起分享。本文着重介绍的是如何鉴别单核型异淋与单
古代瓷器表面元素分析之我见
当下物理检测在古玩领域有点热。物理检测顾名思义就是机器检测，它脱离了原始的眼学目测，而是用一串数据来比对瓷杂类古玩的新老真伪。但是对于物理检测，本人也想发表点谬论，弄出点响动，活跃一下年尾的气氛。第一、坦承的说，我们要用一种敬畏的态度看待物理检测的科学进步，能把一件古物的表里成分通过复杂的数据分析展
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
实验室废水处理之我见
随着经济的发展和科技的进步，当今各大城市的科研单位和高等院校进行的科研实验越来越深入、广泛，从实验室中排放的实验室废水相对增多，废水的水质相当复杂。此类废水的排放周期不定，排放水量也无规律性，且所含污染物成分较为复杂，除含有洗涤剂及常用溶剂等有机物外，还有较多的酸碱，有毒有害的有机物(三致物、
RDN治疗顽固性高血压之我见
对于经皮去肾脏交感神经术（RDN），很多学者一直给予厚望，正因如此，使得人们对Symplicity HTN-3研究结果颇感意外。对此，我利用长微博谈谈自己的看法。 1.我们需要新的治疗措施 尽管药物治疗是控制高血压的主要手段，也是有效手段，但不可否认的是，药物治疗并不能解决所有问题。很多患者在
自体高效CIK细胞免疫治疗之我见
对于传统治疗肿瘤的手段，放疗，化疗和放化疗相结合来治疗肿瘤，其治疗效果并不明显，因此寻找一种新的可以彻底根除肿瘤细胞残留的方法，亟待解决。在过去的20年里，CIK细胞治疗肿瘤成为最具有前景的一种治疗手段。它属于NK的一个II型亚群,表达CD3 和CD56分子.在早期免疫宿主应答中起着重要作用，可
皮内针治疗咽部不适之我见
近段时间的以咽痒、咳嗽、声嘶、咽部异物感等等为主诉的咽部不适病人不少。选择其中的适宜病人，应用皮内针治疗，效果不错。和大家分享如下。 一位老师说过，我们当基层医师的，最主要的本事，就是要在众多的病人中，选择出适合自己治疗的病人。我很赞同这个说法和做法。所以，就本话题而言，怎么选择适宜的咽部不适
半定量RTPCR－（SemiQuantitative－RTPCR－）
RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
RTPCR－PROTOCOL
RT-PCR PROTOCOL材料与方法………………………………………………………… 1．材料 ………………………………………………………1.1 供试用组织(细胞)…………………………………1.2 主要仪器设备………………………………………1.3 主要试剂……………………………………………1.
Standard－RTPCR
RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In one
RTPCR步骤
总RNA提取1. 取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃ 离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，3
RTPCR技术简介和RTPCR引物的选择
RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
美国科学院院士：改进科研出版之我见
每个人都力争做到或成为最好，但较以往更为优秀则意味着要不断提高。也许原本就该如此。发表文章对于科研同行来说十分紧要，因为在科学界，个人成果的价值评议依赖于科研工作的广泛认可，最有效的实现途径就是论文发表。难怪乎在读者数量大、影响因子高的杂志上发表文章日益成为巨大压力。这个问题在那些以科研工作者
做一个精明的买家——采购质谱仪之我见
质谱仪的应用越来越普遍。如何选购质谱仪变成一个越来越受到关注的话题。那么，如何才能成为一个精明的买家呢?本文作者结合自身工作经验从以下三个方面展开讨论，希望对大家的工作能够有所帮助。 一、质谱仪的工作原理与性能特点 质谱仪的分类可以按照其工作原理进行划分，在选购质谱仪之前首先应该对于质谱仪的
做一个精明的买家——采购质谱仪之我见
质谱仪的应用越来越普遍。如何选购质谱仪变成一个越来越受到关注的话题。那么，如何才能成为一个精明的买家呢?本文作者结合自身工作经验从以下三个方面展开讨论，希望对大家的工作能够有所帮助。 一、质谱仪的工作原理与性能特点 质谱仪的分类可以按照其工作原理进行划分，在选购质谱仪之前首先应该对
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
Protocol－for－competitive－RTPCR
For quantifying mRNA, we use a competitive RT-PCR protocol with internal standard RNAs. These are added in a defined quantity to the RNA sample prior
RTPCR的原理
原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。RT- PCR（Re
RTPCR实验流程
1、技术原理实时荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时检测整个PCR进程，zui后通过Ct值与标准曲线的处理对未知样本进行定量分析，是zui常用的基因表达分析技术。有绝对定量与相对定量两种定量分析方法。 图 各种荧光定量曲线示意图2、服务流程及质控2.1 实验流程样本
实时－RTPCR－实验
试剂、试剂盒 RNA 模板 DNA 酶缓冲液 DNA 酶 I DEPC 处理的水 oligo(dT) MgCl2 dNT
实时－RTPCR－实验
试剂、试剂盒 RNA 模板DNA 酶缓冲液 DNA 酶 IDEPC 处理的水oligo(dT)MgCl2 dNTPEDTA实验步骤 —、材料1. 缓冲液、溶液和试剂①10ul 消化体系的组分。RNA 模板（最多 1ug/10ul) xul10X
RTPCR经验浅谈
RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿
实时－RTPCR－实验
本方法使用Superscription反转录系统合成cDNA。进行实时PCR时，FAM或JOE荧光基团既可以标记正向引物，也可以标记反向引物。可以用Trizol试剂提取RNA或按第10章描述的方法提取RNA。样品中的基因组DNA用DNaseI消化掉（参照第10章）。本实验来源于PCR实验指南（第二版
RTPCR技术1
目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中，基因表达产物方面的内容，这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、Ｓ１核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点，该技术提供给研究人员有效的进行测定转录
RTPCR实验步骤
实验材料：水稻叶片的 RNA 。实验原理：目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板，对 RNA 模板不能直接扩增。mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增，这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 RT-PCR 比 Northern 杂交更灵敏，对
RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周
RTPCR技术2
三：操作１：反转录反应按下表准备反应液样品 体积 终浓度５×反应缓冲液 10μl １×dNTP混合液 1μl 0.2mM下游引物 50pmol* 1μm上游引物 50pmol* 1μm25mM MgSO4 2μL 1mMAMV反转录酶 1μl 0.1μ/μlTflDNA聚合酶 1μl 0.1μ/μl