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关于过柱的实验方法和技巧

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。 1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的,但是时间也最长,比如天然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝结),以及有些比较易分解的东西可能得不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大的噪音,而且时间长)。以前曾经大量的过减压柱,对它有比较深厚的感情,但是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气的就行)。特别是在容易分......阅读全文

常压柱,减压柱,加压柱有什么区别?

  过柱子,即柱层析或柱色谱的俗称,是有机化学中最常用也是最基础的一种分离手段。有机化学实验者最常做的三件事莫过于加反应、点板(TLC)和过柱子了,过完柱子拿到了纯的产品这个实验才算是告一段落了,当然之后一般还需要做一些其他的数据表征。作为一个几乎天天跟柱子打交道的有机化学实验者,有过把产物过没了的

蛋白质的纯化

实验概要本实验介绍了用蛋白纯化试剂盒(HisTrap HP Kit)进行蛋白质纯化的过程。主要试剂高分子量蛋白Marker购自上海华舜生物工程有限公司蛋白纯化所用的试剂盒(HisTrap HP Kit)购自Amersham Biosciences ( USA)公司0.45 pm滤膜,磷酸缓冲液,咪唑

有机合成民工呕心沥血总结的过柱子经验

  由于部分新手刚接触过柱,需要系统地了解过柱的方法技巧,我把一个从事多年化学工作,有丰富实验经验的先生的过柱经验转载过来,希望对大家有用。(看了请及时回帖,谢谢~~)  常说的过柱应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过

固相萃取基本原理及吸附杂质模式

一、固相萃取基本原理吸附目标化合物模式在吸附目标化合物模式中,SPE柱对目标化合物的吸附力大于样品基液。如下图所示,当样品通过SPE柱时,目标化合物被吸附在固体填料表面,其它大部分的样品组份则随基质通过柱子。目标化合物可用适当溶剂洗脱下来。为了方便起见,我们将这种萃取模式称为“吸附目标化合物模式”或

SPE固相萃取装置的原理特点

1.样品前处理的重要性   无论是对样品的化学分析还是在生物工程中,样品的分离、纯化都是必不可少的前处理步骤。样品前处理的好坏将直接影响结果。   根据LC-GC Int.杂志对世界1000多个实验室进行的统计,样品前处理所花费的时间占整个分析过程的 61%现代的自动化分

免疫球蛋白提取技术(Immunoglobulin isolation technique)

免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig)的含量代表着机体体液免疫的水平,并进一步代表着B细胞的功能,因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。 随着免疫学的发展和需要,免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很

HPLC异常峰峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题解析

  高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法,这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题,如何解决这些问题呢?  1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,

关于柱层析的实验方法和技巧

(注意:有机溶剂对身体特有害别是心肺;肝脏等所有过柱操作都要在通风橱里进行!!)常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。 1、柱子可以分为:加压,常压,减压压力可以增

色谱柱相关的100个问题

  色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。  1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论,那什么样的柱子可以反冲,什么不可以。反冲后是正者用,还是反着用。具体到各型号

过柱的实验方法和技巧

   常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。    一:柱子可以分为:加压,常压,减压    1.压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板

过柱的实验方法和技巧

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。 一:柱子可以分为:加压,常压,减压1.压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件

抗磷酸肽的多克隆抗体制备实验

实验方法原理 实验材料 用磷酸肽-BSA 交联物免疫过的兔的粗制血清试剂、试剂盒 PBS/叠氮化物MgCl2仪器、耗材 分光光度计透析袋填装有 BSA-琼脂糖亲和介质的柱子填装有磷酸酪氨酸亲和介质的柱子填装有同种非磷酸肽亲和介质的柱子填装有同源的磷酸肽亲和介质的柱子填装有阳性-筛选的磷酸肽亲和介质的

抗磷酸肽的多克隆抗体制备实验

实验材料用磷酸肽-BSA 交联物免疫过的兔的粗制血清试剂、试剂盒PBS/叠氮化物MgCl2仪器、耗材分光光度计透析袋填装有 BSA-琼脂糖亲和介质的柱子填装有磷酸酪氨酸亲和介质的柱子填装有同种非磷酸肽亲和介质的柱子填装有同源的磷酸肽亲和介质的柱子填装有阳性-筛选的磷酸肽亲和介质的柱子实验步骤1. 将

免疫球蛋白提取技术(二)

4、禽血清IgG的分离与提纯(Na2SO4法)(1)试剂①5%葡聚糖硫酸盐②0.02Mol/L MnCl2溶液③无水硫酸钠④pH8.2硼酸盐缓冲液⑤0.06Mol/L pH7.4PB液(2)操作方法①取禽血清10ml加5%葡聚糖硫酸盐液,0.40ml和0.025Mol/L MnCl21.00ml充分

TLC柱层析过柱的技巧

过柱的技巧柱层析按过柱时的压力可以分为: 加压, 常压, 减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度, 减少产品收集的时间, 但是会减低柱子的塔板数。 所以其他条件相同的时候,常压柱是效率最高的, 但是时间也最长, 例如一些天然化合物的分离,有时一个柱子过几个月也有可能。减压柱能够减少硅胶的使用量,但是由于

液相色谱常见问题及处理方法

HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法  1、样品量不足,解决办法为增加样品量  2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子  3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器  4、检测器衰减太多。调整衰减即可。  5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间

生化分离技术--柱层析分离

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望 能有所帮助。 柱子可以分为:加压,常压,减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所

液相常见问题10小问

  1 如何进行色谱柱的维护?   ①建议检测前样品和流动相进行过滤。   ②建议每天做完样品后及时进行清洗。   ③常规检测   测试完后直接把色谱柱反向连接采用90%有机相冲洗45min,最后保存在纯甲醇或纯乙腈中。   ④使用缓冲盐条件:   a等度条件:使用缓冲盐之前和之后都用过

液相常见问题15小问!

关于漂移问题①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定②流动相发生変化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。③流动相不合适,解

常见几个气相色谱问题及解决方案

气相色谱仪作为一种分析检测仪器,因具有分离效能高、准确度高、进样量少和多组分同时测定等优点,被广泛地应用于各种领域。但由于检测员素质、样品性质以及仪器本身等方面的原因,常常出现各种问题,严重影响正常的生产,甚至造成巨大经济损失。本文简单介绍气相色谱仪的几种常见故障及排除方法,以期与从事气相色谱仪维修

一些色谱实验室技巧

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。柱子可以分为:加压,常压,减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱

柱层析分离技术简述

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。柱子可以分为:加压,常压,减压。        &nbs

识别特异性酪氨酸磷酸化多肽抗体的制备

实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质(Sigma) 填 装(如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱(IOml 柱床体积;见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0

HPLC常见故障排除小贴士

  高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。  鉴于HPLC在全行业运用越来越广泛,因此每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC,对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余,才能在运行故障的时候即使解决问题,提高工作效率。

一些色谱实验室技巧

常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮助。柱子可以分为:加压,常压,减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度,减少产品收集的时间,但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候,常压柱

液相色谱柱常见问题解决方案

  1. 柱压高  压力单位换算:1bar=0.987大气压=14.503psi=0.1MPa=1.0197kg/cm2  (1)新柱(未进过样品或只进过柱效测试标样)压力高:  以原厂报告上完全一样的条件下测试比较,若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内,可视为正常范围;若高于出厂报告

气相色谱仪“闹脾气”,这些方法能急救!

气相色谱仪在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广,它除用于定量和定性分析外,还能测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。今天我们主要来介绍一下气相色谱常见问题及解决方法,希望可以帮助到大家。   一、载气系统  1、漏气问题及解决方法

气相色谱仪的五个系统

  一、载气系统  1、漏气问题及解决方法  漏气,分为载气漏气和辅助气漏气。  载气漏气时,色谱图有以下变化:  1. 基线变化  a、基线不稳定(噪声大、恒温操作时无规则波动或向一个方向漂移)。  ①基线燥声大,可能是载气流速过大或漏气;  ②基线正弦波波动,可能是载气流量不稳定,除检查气源外,

色谱实验室过柱子技巧归纳

柱层析分离技巧可以说是经验成分居多,本文是小编从网络摘录的一段某热心网友的过柱心得,希望能对您有所帮助。   柱层析技术也称柱色谱技术,即常说的过柱子,应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相,将蛋白质混合

蛋白柱日常维护和常见问题

分离时选择了合适的蛋白柱,有时往往不能成功地完成蛋白的分离,同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果,正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。不论使用什么类型的蛋白柱,首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂,什么类型的样品,流速