2.CIK 培养用细胞因子和抗体：
CD3 激发型单抗：
T
细胞活化的第一信号来自于 T 细胞表面的受体，即 T 细胞抗原受体 （T cell antigen receptor, TCR） 与 APC
提呈的抗原的特异性结合，也就是 T 细胞对抗原的特异性识别。 TCR 是由 2 条不同肽链构成的异二聚体，在 T 细胞表面，其与 CD3
分子通过非共价键 结合，形成 TCR/CD3 复合体。TCR 识别特异性抗原后会引起 CD3 和 T 细胞表面的辅助 受体 CD4 或 CD8
分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶 （Lck, Fyn 和 ZAP-70 等），促使 CD3
分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序 （immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）
中的酪氨酸 （Y） 磷酸化。磷酸化的酪氨酸 （pY） 进一步 磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应 （磷脂酰肌醇途径或 MAP
激 酶途径等），最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控 T 细胞增殖和活化的靶基因 （如 IL-2 和 IFN-γ
等），引起基因的表达和转录，T 细胞因而由静止状态转为 增殖和活化状态。
由上可见，CD3
分子在 T 细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3 激发 型单抗与 T 细胞表面 CD3 分子特异性结合后，可引起 CD3 分子胞浆区
ITAM 基序中酪 氨酸的磷酸化，进而导致 T 细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使 T 细胞增殖和活 化。也就是说，CD3
激发型单抗能够模拟抗原与 TCR/CD3 复合物的识别和激活过程， 从而引起 T 细胞的增殖与活化，因此是 CIK
细胞培养中不可或缺的刺激因素。
此外，CD3
激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为 OKT-3 的 CD3 激发型单抗可以刺激所有人的 T 细胞的增殖，而其它克隆号的
CD3 激发型单抗 仅能刺激一部分人的 T 细胞。因此，在进行 CIK 培养时，最好选用 OKT-3 克隆，以保 证每个患者的 T
细胞均能被激活。
IL-2 （白细胞介素-2）
IL-2
最初发现时被称为 T 细胞生长因子 （T cell growth factor, TCGF），是引起 T 细胞 增殖最重要的细胞因子。IL-2
既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与 T 细胞表面的 IL-2 受体 （IL-2R） 的特异性结合而促使 T
细胞活化，并进入细胞分裂状态。
此外，IL-2 还可刺激 NK 细胞的生长并增强其杀伤能力。因此 CIK 细胞培养中须添加IL-2,以促进 T 细胞的增殖与活化。
IFN-γ （干扰素-γ）
IFN-γ
具有上调外周血淋巴细胞表面 IL-2R 表达的作用，因此会增强 T 细胞对 IL-2 促 增殖反应的敏感度和强度。在诱导 CIK
细胞形成的过程中加入 IFN- g ,可降低 IL-2 的用量。 研究发现，IFN-γ加入的顺序与 CIK 的细胞毒活性密切相关。先加入
IFN- g,培养24后再 加入 IL-2,可明显提高 CIK 的细胞毒活性。
IL-1α（白细胞介素-1α）
IL-1α也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达 IL-2R.当 IL-1α与 IFN-γ和激发型CD3 单抗合用时，可以明显提高 CIK 的细胞毒作用。
【细胞制备】
1. 外周血单个核细胞的采集
1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞 80 - 100 ml。
1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞 （PBMC）。
1.3无血清培养液洗涤 2 次，获得纯度在 90% 以上的 PBMC,细胞数量需达到 1-3 x108。
