ELISA是一种经典的测定液体样本中蛋白含量的方法。
该方法优点在于可以准确定量蛋白含量,且测定样本的种类可以多种多样。本期小编带你一起了解ELISA不同样品的制备方法。
细胞培养上清液
移取细胞培养基至离心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度离心 10 分钟。
立即分装上清液,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。
细胞提取物
将组织培养板置于冰上。
吸取培养基,并小心地用冰冷的 PBS 清洗细胞一次。
吸取 PBS,每 100 mm 孔板加入 0.5 mL 完全提取缓冲液。
刮取细胞收集在倾斜的孔板中,并移至预冷的试管内。
短暂涡旋,冰上孵育 15-30 分钟。
4℃ 下以 13 000 rpm 的速度离心 10 分钟,沉淀不溶性内容物。
将上清液(即可溶性细胞提取物)等分,置于冰上清洁冷冻管,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。
条件培养液
将细胞置于完全(含血清)生长培养基中,使细胞增殖至所需的融合水平。
去除生长培养基,并非常小心地用几毫升温 PBS 清洗。重复清洗步骤。
去除最后一次 PBS 洗液,小心地加入无血清生长培养基。
孵育 1-2 天。
移取培养基至离心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度离心 10 分钟。
立即分装上清液,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。
牛奶
采集样品,4℃ 下以 10 000 x g 离心 2 分钟。
分装上清液并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。
血浆