发布时间:2019-10-15 16:48 原文链接: ELISA

ELISA是一种经典的测定液体样本中蛋白含量的方法。


该方法优点在于可以准确定量蛋白含量,且测定样本的种类可以多种多样。本期小编带你一起了解ELISA不同样品的制备方法。


细胞培养上清液


移取细胞培养基至离心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度离心 10 分钟。

立即分装上清液,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。


细胞提取物


将组织培养板置于冰上。

吸取培养基,并小心地用冰冷的 PBS 清洗细胞一次。

吸取 PBS,每 100 mm 孔板加入 0.5 mL 完全提取缓冲液。

刮取细胞收集在倾斜的孔板中,并移至预冷的试管内。

短暂涡旋,冰上孵育 15-30 分钟。

4℃ 下以 13 000 rpm 的速度离心 10 分钟,沉淀不溶性内容物。

将上清液(即可溶性细胞提取物)等分,置于冰上清洁冷冻管,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。


条件培养液


将细胞置于完全(含血清)生长培养基中,使细胞增殖至所需的融合水平。

去除生长培养基,并非常小心地用几毫升温 PBS 清洗。重复清洗步骤。

去除最后一次 PBS 洗液,小心地加入无血清生长培养基。

孵育 1-2 天。

移取培养基至离心管中,4℃ 下以 1500 rpm 的速度离心 10 分钟。

立即分装上清液,并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。


牛奶


采集样品,4℃ 下以 10 000 x g 离心 2 分钟。

分装上清液并将样品储存在 -80℃ 下。尽量减少冻融循环。


血浆