CRISPR/Cas9蛋白切割DNA过程中的调控和校验机制

清华大学生命科学学院陈春来研究组在《Cell Reports》杂志发表了研究论文,题目为“The Conformational Dynamics of Cas9 Governing DNA Cleavage Are Revealed by Single-Molecule FRET”(利用单分子FRET揭示Cas9在DNA切割过程中的动态构象)。该论文展示了Cas9可以自发地在三种主要构象中转换,揭示了Cas9蛋白与PAM远端DNA/RNA双链相互作用可长程别构调控Cas9切割结构域的局部构象,这是Cas9切割靶标DNA之前的最后校验步骤。最后,该文提出了优化和设计高保真Cas9的新思路,即通过突变Cas9蛋白以影响这种长程别构调控机制,可提高Cas9的识别特异性。 CIRSPR/Cas9是一种可以由一条单链sgRNA(single guide RNA)指导的利用Cas9核酸酶对靶向DNA进行特异性识别和切割的技术。由于其可......阅读全文

什么是CRISPR/Cas9技术

CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的基因敲除、敲入或点突变。

crispr-cas9基因敲除原理

基本原理:CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族,其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游,是富含AT长度为300~500bp的区域,被认为可能是CRISPR

什么是CRISPR/Cas9技术

CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的基因敲除、敲入或点突变。

什么是CRISPR/CAS9技术

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR/Cas9是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。

crispr-cas9基因敲除原理

基本原理:CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族,其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游,是富含AT长度为300~500bp的区域,被认为可能是CRISPR

什么是CRISPR/CAS9技术

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由RNA指导的Cas9核酸酶对靶向基因进行编辑的技术。CRISPR/Cas9是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。

清华大学颜宁教授最新综述文章:聚焦葡萄糖转运蛋白

  近日,来自清华大学的颜宁(Nieng Yan)教授与博士生邓东(Dong Deng)发表了一篇题为“GLUT, SGLT, and SWEET: Structural and mechanistic investigations of the glucose transporters”的综述文章

smFRET检测GPCR调控下游蛋白arrestin的构象分布研究获进展

  G蛋白偶联受体(GPCR)是目前已知的人类基因组中最大的膜蛋白家族,约30%的临床处方药的直接靶点是GPCR,负责80%左右的跨膜信号转导,参与调控人体中多数病理与生理过程。GPCR主要通过G蛋白及arrestin将细胞外的刺激转变为细胞内信号。近年来,结构生物学研究方法的进步为研究GPCR及其

高内涵——基于FRET分析活细胞中的ERK信号转导

Extracellular signal-regulated kinase(ERK)是胚胎发生,细胞分化,细胞增殖和细胞死亡调控的关键组成部分。ERK途径起源于质膜中的活化受体,并通过Ras/Raf/MEK至ERK(图1)。 图1. Ras/Raf/MEK/ERK信号级联将信号从细胞表面受体如EGF

Science:CRISPR/Cas9大革命

        DNA编辑技术CRISPR近年来风生水起,已经开始取代了其它基因组编辑工具,如锌指核酸酶和 TALENs等。不过目前科学家们对于这一技术中的RNA引导核酸内切酶:Cas9了解的还不够多,如果能更精确的掌握这种酶在CRISPR系统中如何发挥作用的,将能提高这一技术的使用效率和

CRISPR专家发表CRISPR/Cas9综述

  CRISPR技术的确在科学界掀起了基因组编辑的狂潮。在Pubmed中快速检索“CRISPR”,目前已有1400多项结果。也相继有专家为该技术撰写了综述论文,例如:Science综述:CRISPR-Cas9系统的历史和未来;北大魏文胜最新发表CRISPR综述。  最近,来自美国加州大学伯克利分校和

Cell:CRISPR/Cas9再获重要突破

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crispr/cas9的技术优缺点

CRISPR (Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞(包括iPS)的特定的基因组位点上进行切割,修饰。 Rudol

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CRISPR (Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞(包括iPS)的特定的基因组位点上进行切割,修饰。 Rudol

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生物大分子相互作用检测技术新进展

荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer,FRET),是指能量从一种受激发的荧光基团 (fluorophore)以非辐射的方式转移到另一种荧光基团的物理现象。FRET的能量转移效率是两个荧光基团间距离的函数,并对此距离十分敏感,它的有效

哈尔滨工业大学Nature发表CRISPR研究重要成果

  来自哈尔滨工业大学、清华大学的研究人员报告称,他们获得了Cpf1/CRISPR RNA复合物的晶体结构。这一重要的研究成果发布在4月20日的《自然》(Nature)杂志上。  领导这一研究的是哈尔滨工业大学生命科学与技术学院的黄志伟(Zhiwei Huang)教授。其主要研究方向为结构分子生物学

绿色荧光蛋白在信号转导中的应用

  新近研究发现,某些突变的 GFP 能够发生荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer,FRET)。FRET 是一种从荧光分子的激发状态到临近基态接受分子之间量子力学能量转移的现象。FRET 发生的前提条件是,荧光接受分子必须在荧光提供分子释放

纳米胶囊高效输送Cas9核糖核酸蛋白复合物可基因组编辑

  编辑遗传密码的新工具为遗传性疾病、某些癌症甚至顽固病毒感染的新疗法带来了希望。但是,将基因疗法传递到身体特定组织的典型方法可能是复杂的,并可能导致令人不安的副作用。  威斯康辛大学麦迪逊分校的研究人员通过将基因编辑有效载荷装入可定制的微型合成纳米胶囊中解决了其中的许多问题。近日他们在Nature

借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生...

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生物医学研究新工具:FLIMFRET生物传感器

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适用于TRFRET的荧光染料:trFluor-链霉亲和素

时间分辨荧光:理论上,荧光是最灵敏的检测手段,由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此,很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。而现在偏振,淬灭,时间关联,荧光寿命改变以及荧光共振能量转移(FRET)已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。在生物溶液或血清中的很多化合物和蛋白质是自发

北大在基因组编辑技术应用上取得突破性进展

  北大生命科学学院刘东课题组应用CRISPR-Cas9基因组编辑(genome editing)技术,在模式生物线虫中成功实现了不同类型的基因打靶:1、在性腺特异表达Cas9的转基因线虫中,通过饲喂基因靶点特异的gRNA或直接向线虫性腺注射Cas9和gRNA(DNA或RNA),均获得了可遗传的突变

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  来自清华大学生命科学学院、中科院植物研究所的研究人员首次报道了线粒体II型NADH脱氢酶的晶体结构,相关论文 “Structural insight into the type-II mitochondrial NADH dehydrogenases”公布在10月21日的《自然》(Nat

清华大学,再添院士!

据清华大学材料学院消息,2月8日,日本工程院第41次理事会通过,清华大学材料学院李敬锋教授当选为日本工程院外籍院士。日本工程院(The Engineering Academy of Japan)成立于1987年,由大学、产业界以及国家机关中在工程及科学技术相关领域做出卓越贡献,并具有重要领导和指导地

地方高校,签约清华大学

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清华大学最新《PNAS》文章

来自清华大学生物科学与技术系,冷泉港实验室的研究人员发现一种对于果蝇嗅觉长时程记忆形成必需的突变:AKAP Yu,这有利于进一步了解果蝇神经传递记忆形成过程中蛋白激酶A信号通路的作用。这一研究成果公布在《美国国家科学院刊》(PNAS)杂志上。 文章的通讯作者是来自清华大学生物科学与技术系的周海梦

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清华百人计划发表CRISPR新成果

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