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核糖体失活展示系统实验

实验材料RTA 基因试剂、试剂盒结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材RNeasy™mini 试剂盒实验步骤这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和间隔区的 DNA 来构建 RIDS ( 图 13.2A )。13. 3.1.1〜13.3.3.3 部分详述了这个过程。尽管理论上用聚合酶链反应(PCR) 制备双链 DNA 是可行的,但是我们推荐用质粒来构建此 DNA,因为用 PCR 来连接不同部分(包括 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和间隔区),很难保证不会引入非特异性扩增。在这个章节中,我们描述了构建 RIDS 载体的过程。由于采用标准的重组 DNA 方法来构建载体,因为篇幅有限,DNA 的操作过程在此就不赘述了。3.1.1 构建 pLRS 表达载体首先,我们需要准备通......阅读全文

核糖体失活展示系统实验

核糖体失活展示系统             实验材料 RTA 基因

核糖体失活展示系统实验

实验材料 RTA 基因 试剂、试剂盒 结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液 仪器、耗材 RNeasy™mini 试剂盒 实验步骤 这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。 3.1 RIDS 表达载体的构建

核糖体失活展示系统实验

实验材料 RTA 基因 试剂、试剂盒 结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液 仪器、耗材 RNeasy™mini 试剂盒 实验步骤 这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。 3.1 RIDS 表达载体的构建 首先,需要准备含编码

非随机 X 染色体失活的检测实验

实验材料gDNA 样品试剂、试剂盒NE 缓冲液Hpa Ⅱ 限制性内切核酸酶仪器、耗材微量离心管循环温度仪实验步骤展开

内切酶的热失活参数

 热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃,温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。在50μl的反应体系中,37℃条件下,以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物,加入5-10μl内切酶

Cell:高通量测序解析神秘X失活

  来自北卡罗莱纳大学遗传学系Terry Magnuson实验室的研究人员完成了一项最新研究成果,拓宽了我们对于一个特殊的过程:X去活性(X inactivation)的理解,有助于更深入了解细胞如何调控这一过程中的X染色体沉默。相关成果公布在11月21日的Cell杂志上。   文章的第

Cell揭示神秘X失活的分子机制

  许多蛋白质与一个称为Xist的RNA分子相互作用,以覆盖和沉默每个雌性细胞中的一个X染色体。了解基因如何被靶定和沉默,可以帮助研究人员研究性别特异性的疾病。  加菲猫有着谁也不知道的秘密。这只卡通猫是一种遗传异常,并不是因为它对烤宽面条贪得无厌的渴望,而是在于它的毛色。在漫画世界以外,橙色和黑色

cell:早期端粒酶失活将加速衰老

  近日,来自美国的华裔科学家在著名国际期刊cell发表了他们的最新研究成果。他们通过实验发现,酵母端粒酶早期失活会导致细胞出现短暂的DNA损伤应答,这一过程会加速酵母母细胞衰老,并且ETI导致的加速衰老过程发生在端粒缩短诱导的细胞衰老之前。   研究人员指出,端粒酶对于长期维持和保护端粒具有重

Naure揭示失活X染色体惊人发现

  马萨诸塞大学医学院、居里研究院和斯坦福大学的科学家们,详细地查看了磁性哺乳动物失活X染色体紧密包装的小结构——巴尔氏小体(Barr body)的内部,并开发出了一个模型系统,其有可能成为了解染色体结构和基因表达的一个重要工具。  长期以来人们都认为失活的X染色体是一种相当无组织的紧密结构,但发表

基因编辑疗法或使癌细胞永久失活

据《科学进展》杂志日前报道,以色列特拉维夫大学的一项研究证明,CRISPR/Cas9系统在治疗侵入性癌症方面非常有效,这是在寻找癌症治愈方法迈出的重要一步。 研究人员开发的一种基于脂质纳米颗粒的新型递送系统CRISPR—LNP,可专门针对癌细胞并通过基因操作将其破坏。该系统携带的一个遗传信使(信