RACE技术扩增构建全长cDNA文库
实验概要利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法，进行全长C库的构建，从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。实验原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签，用通用引物识别并配对标签序列，PCR扩增后克隆PCR产物，从而构建出全长并有正确阅读框架的C库。RACE技术最早是cDNA水平上加接头，以扩增未知5’序列。而随着技术的进展，目前RACE技术已发展到直接以mRNA为模板进行操作，这就保证了全长cDNA的克隆，为研究5’和3’非编码区及启动子提供了条件。RACE分3’RACE和5’RACE。3’RACE原理如图1。其用带olig(dt)和特异酶切位点的序列为3’引物；用特异序列为5’引物，经RT－PCR后，扩增出3’全长序列，利用特异酶切位点，插入载体。 5’RACE分两种，其一为SMART（Mechanism ......阅读全文
RACE服务
这时我们可以根据基因的一段已知序列(或一段同源序列)，利用3'-Race方法获得该基因的3'端序列，或者利用5'-Race方法得到该基因的5'端序列。服务流程:1、先由您提供背景资料，其中包括已知的DNA序列部分，RNA的情况，所扩增基因的估计长度，是否具有同源序列等
3'-RACE PCR
实验概要 This technique is used to obtain the 3'end of a cDNA, it requires some sequence information internal to the mRNA under study. The
RACE PCR简介
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA
帽子转换 RACE 实验
试剂、试剂盒 寡核苷酸引物cDNA 文库HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液dNTP 溶液TE反转录缓冲液RNasinSuperscript II 逆转录酶生物素标记的引物 Ptotal帽子发现接头引物poly(A)+RNA仪器、耗材 热
帽子转换 RACE 实验
这里介绍的方法，是用一个生物素化的引物来帮助纯化第一链产物。这些纯化技术是可以互换的。与之类似，使用这里所介绍的基于寡核苷酸-(dT) 的引物，在反转录的起始阶段使用的基因特异性引物（如上所述）也是可以互换的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒寡核苷酸引物cD
3’RACE 实验心得
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所
帽子转换 RACE 实验
试剂、试剂盒 寡核苷酸引物 cDNA 文库 HerculesHot-Start 聚合酶 HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液 dNTP 溶液
5端RACE升级版
实验概要完成这个RACE需要全套反转录系统，当然选一个好的反转录酶（无RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，还有这几条引物： Adapter A AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN cDNA synthesis and ad
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA
RACE技术的原理和操作
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA