常用的分子生物学基本技术
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针(probe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。固相杂交固相杂交(solid-phase hybridization)是将变性的DNA固定于固体基质(硝酸纤维素膜或尼龙滤膜)上,再与探针进行杂交,故也称为膜上印迹杂交。斑步杂交(dot hybridization)是道先将被测的D......阅读全文
分子生物学常用实验技术(page-1)
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分
分子生物学常用实验技术(page-2)
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
分子生物学常用实验技术(page-3)
分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN
生物化学与分子生物学最常用的实验技术
分子细胞生物学研究所用的实验技术有哪些分子诊断学的研究范畴包括:利用遗传学、病理学、免疫学、生物化学、基因组学、蛋白质组学和分子生物学的理论和方法探讨疾病发生和发展的分子机制。为整个疾病过程寻求特异的分子诊断指标,以及利用分子生物学技术为这些分子诊断指标建立临床实用的检测方法。细胞培养技术指的是细胞
分子生物学常用试剂的配制
1.LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液,应在950ml去离子水中加入: 细菌培养用酵母提取物(bacto-yeastextract) 5g 细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g NaCl 10g 摇动容器直至溶质完全溶解,用5mo
分子生物学常用试剂的配制
1.LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制配制每升LB培养液,应在950ml去离子水中加入:细菌培养用酵母提取物(bacto-yeastextract)5g细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10gNaCl10g摇动容器直至溶质完全溶解,用5mol/LNaOH(约0.2
分子生物学常用试剂配置
一、分子生物学常用贮存液的配制1、30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml.用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯
分子生物学常用溶液配制
分子生物学常用溶液配制一、分子生物学常用贮存液的配制1.30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温
分子生物学常用试剂的配制(一)
1.LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制 配制每升LB培养液,应在950ml去离子水中加入: 细菌培养用酵母提取物(bacto-yeastextract) 5g 细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g NaCl 10g
分子生物学常用试剂的配制(二)
15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml) 40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸(TBE):5×浓贮存液(每升):54g Tris 碱 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
分子生物学常用贮存液的配制
分子生物学常用贮存液的配制 1、30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml.用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍!
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍! 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍!
核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成
分子生物学实验常用试剂配置
一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺(ammon
分子生物学实验常用试剂配置
一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L乙酸胺(ammo
分子生物学实验常用试剂配置
常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammonium ac
常用电镜原位杂交技术的基本程序
原位杂交技术自创立以来,为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病理学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供了极其宝贵的资料,发挥了其他技术难以取代的作用。但不论是使用放射性核素探针,还是非放射性探针,大部分研究工作都还限于光镜水平。为了对检测的靶核酸进行更精确的亚细胞定位,以及能
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(二)
核酸原位杂交用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细胞级或组织切片中核酸进行复性杂交并对其实行检测的方法,称为核酸原位杂交(nucleic acid hybridization in situ)。用来检测DNA在细胞核或染色休上的分布,与细胞内RNA进行杂交以研究该组织细胞中特定基因表达水闰;还
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(一)
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的
专题:常用分子生物学实验方法
*章 基因克隆 1. 操作流程 收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体 连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴 定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆 信息输入数据库——>质粒实物保存 *章 基
分子生物学实验室常用设备
分子生物学是从分子水平上研究生物大分子的结构与功能,从而阐明生命现象本质的科学。其研究的主要内容为核酸(DNA,RNA)和蛋白质。来宝商城为广大食品、制药、科研、医疗、高校等领域的实验室用户提供*、质优价低的产品和完善的技术服务,始终坚持以用户为中心,打造更专业、更可靠、更的实验室电商。分子生物学实
分子生物学技术的分类
目前,常用的分子生物学技术有如下几种 : PCR- 单链构象多态性分析(PCR- single strand conformation analysis,PCR- SSCP) 是近年来在基因突变检测中运用最广泛的方法之一。PCR- SSCP 技术凭借突变可引起单链DNA三级构象改变,通过观察单链DN
分子生物学技术的分类
目前,常用的分子生物学技术有如下几种[1]: PCR单链构象多态性分析 PCR-单链构象多态性分析(PCR -single strand conformation analysis,PCR -SSCP) 是近年来在基因突变检测中运用最广泛的方法之一。PCR -SSCP 技术凭借突变可引起单链
分子生物学技术的应用
分子生物学技术:可应用于遗传性疾病的研究和病原体的检测及肿瘤的病因学、发病学、诊断和治疗等方面的研究提高到了基因分子水平。 生物学定义:生物学是研究生命现象和生物活动规律的科学。 据研究对象分为动物学、植物学、微生物学、古生物学等;依研究内容,分为分类学、解剖学、生理学、细胞学、分子生物学、
分子生物学实验常用的仪器设备是什么
分子生物学实验常用的仪器设备是什么 在分子水平上研究生命现象的科学。通过研究生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功能和生物合成等方面来阐明各种生命现象的本质。研究内容包括各种生命过程。比如光合作用、发育的分子机制、神经活动的机理、癌的发生等。 分子生物学实验包含了生物大分子制备和分析常用技术、蛋白
分子生物学技术都包括哪些技术
分子生物学技术: PCR、分子克隆、核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳测序、DNA, RNA 提取、转化外源DNA、体外转录、逆转录、cDNA文库构建、原位杂交、酵母双杂交、差减杂交、扣除杂交、蓝白斑筛选、抗生素筛选 、基因工程技术大部分都是依据分子生物学原理设计出来的。 分子生物学的基本含义
最前沿的分子生物学技术
自然科学的发展从20世纪以来有过两次重大变革,第一次是在物理学领域,它不仅全面推动了自然科学的发展,所引起的技术革命也已经给人类生活带来了巨大影响。第二次变革发生在生物学领域,是由于物理学和化学广泛而又深刻地渗入生物学的结果。这次变革以50年代中脱氧核糖核酸(DNA)双螺旋结构的确定和蛋白质晶体结构
分子生物学常用数据库汇总及推荐
分子生物学主要研究具体生物大分子在某一生物学行为过程中的表达变化、功能和作用方式;主要涉及基因的表达调控、蛋白相互作用、信号分子间的交互对话等。分子生物学实验常需要我们在具体实验前对所关注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素调控、与哪些分子可能存在潜在的相互作用,可能参与哪些生物学行为等进行一些初步
分子生物学实验诊断技术
一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度,在复杂的物体中,使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性,核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年,目前研究实验室用得多,临床实验室用得较少,除成本高外,关键是操作