胚胎中细胞基因打靶方法
胚胎中细胞基因打靶方法置换型设计物的制备1．选择靶基因的一个部分作为设计物的组成，还包括有靶基因的另一个部分作为Southern杂交探针，以鉴定细胞中是否已发生同源重组之用。2．在质粒载体中构建一个克隆；neo基因能阻断靶基因的表达，在neo的两侧保持保留同源区；在同源区外的置换型设计物中包含一个胸腺嘧啶激酶（TK）基因。3．用限制性内切酶消化设计物DNA使成线形；设计物DNA线形化后，质粒DNA仍附于在TK基因上。如果设计物在基因组发生随机插入中出现任何DNA序列丢失时，线性态有助于保持TK基因的活性。4．用酚/氯仿抽提设计物DNA。5．用加两个体积的95％乙醇沉淀，微型离心机离心30秒，去上清，使沉淀物干燥到仍保持微湿润状态。6．把沉淀物溶于100μl水中，检测是否已被彻底消化，在凝胶电泳中测定DNA的浓度。 转染设计物和ES细胞的选择7．把细胞培养在ES/LIF培养基中；每2～3天传代细胞，把细胞接种到100mm......阅读全文
胚胎中细胞基因打靶方法
胚胎中细胞基因打靶方法 置换型设计物的制备 1．选择靶基因的一个部分作为设计物的组成，还包括有靶基因的另一个部分作为Southern杂交探针，以鉴定细胞中是否已发生同源重组之用。 2．在质粒载体中构建一个克隆；neo基因能阻断靶基因的表达，在neo的两侧保持保留同源区；在同源区外的置换型设计
基因打靶技术的原理方法
将外源DNA导入靶细胞后，利用基因重组，将外源DNA与靶细胞内染色体上同源DNA间进行重组，从而将外源DNA定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点。对于不同的生物体，所使用的基因打靶的方法也不用。对于小鼠来说，大致的流程如下：从小鼠胚胎上提取干细胞；同时，构建靶载体，靶载体中含有与靶基因同源的DNA
Nature: 在非分裂期细胞中实现基因打靶的可能
基因打靶技术，是利用同源重组的方法，建立基因定点敲除细胞系或获得基因定点敲除动物。无论CRISPR/Cas还是TALEN,都是通过造成靶位点的双链断裂，诱导靶基因产生突变。而通过同源重组实现的DNA修复在G1期的细胞中是高度抑制的，以确保有丝分裂只发生在姐妹染色单体之间。因而只也是在DNA复制之
早期胚胎发育中的单胚胎细胞基因表达（一）
Single-embryo Gene Expression for Early Embryo DevelopmentMylene Yao, M.D. Assistant ProfessorDept. of Obstetrics and Gynecology Stanford UniversityMy
早期胚胎发育中的单胚胎细胞基因表达（二）
“We picked 42 genes to validate on the BioMark system,” Dr. Yao said. “We picked them to represent different functional categories.”“We used the F
胚胎干细胞法的方法过程
胚胎干细胞（ES细胞）是指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进行体外培养
胚胎干细胞的分离方法介绍
分离囊胚的内细胞群（ICM）细胞，再进行体外培养即可取得胚胎干细胞。目前，取得胚胎干细胞的方法已有一定改进，但仍无可避免地会杀死胚胎。囊胚由两大部分构成：处于外围的滋养层以及处于内部的内细胞群。滋养层细胞会分化为胚胎外的组织（胎盘等），而内细胞群则会分化为胚胎的各种结构。最早期分离胚胎干细胞的方法是
条件基因打靶的定义
中文名称条件基因打靶英文名称conditional gene targeting定 义一种位点特异的基因重组技术，将带有可调控序列的外源基因替代受体细胞基因组中与该外源基因有同源序列的基因,从而可通过外界因素人工调节该目的基因的表达。应用学科免疫学（一级学科），概论（二级学科），免疫学相关名词（三
基因打靶技术的研究
基因打靶技术是从20世纪80年代发展起来的，是建立在对同源重组不断了解的基础之上。首先是以酵母这种较为简单的真核模式生物为基础，来对相关技术进行研究。随着外源DNA导入酵母细胞方法的建立、标记基因有效选择的利用、同源重组转化子筛选系统的建立、载体同源序列DNA（靶标）双链断裂提高同源重组效率的利用，
揭秘胚胎发育奥秘！为何发育中胚胎细胞彼此并不相同？
近日，一项刊登在国际杂志Molecular Cell上的研究报告中，来自纽约大学的科学家们通过研究阐明了在胚胎发育（embryogenesis）过程中细胞变得彼此不同的分子机制，相关研究结果或能帮助阐明胚胎发育的遗传规律，同时也能帮助理解疾病发生和出生缺陷的原因。图片来源：commons.wik