石蜡包埋组织的DNA提取及其应用

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突变和DNA甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表达和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织,是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原位PCR分析的分子生物学方法,是免疫细胞化学技术的重要延伸。通过对DNA或mRNA分析亦可直接证实或补充免疫细胞化学的发现。这些对形态学家较为熟悉的原位分子生物学技术,本节 不再赘述。Goelz(1985)和Dubeau 等(1986)成功地从蜡块中提取出高质量的DNA,完全可以满足某些肿瘤分子生物学研究的需要,结束了DNA研究依赖于新鲜或冰冻组织和细胞的历史,而且可以广泛地应用于大宗病例的回顾性研究,对肿瘤发生的分子机制的探......阅读全文

动物组织块DNA的提取

实验原理DNA是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞;苯酚和氯仿可使蛋白质变性,用其混合液(酚:氯仿:异戊醇)重复抽提,使蛋白质变性,然后离心除去变性蛋白质;RNase降解RNA,从而得到纯净的DNA分子。实验试剂1.生理盐水2.十二烷基硫酸钠(SDS)3.三

动物组织块DNA的提取

【实验目的】(1)学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。(2)从肝脏组织中提取到一定量的纯净的DNA样品。【实验原理】DNA是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞;苯酚和氯仿可使蛋白质变性,用其混合液(酚:氯仿:异戊醇)重复抽提,使蛋白质变性,然后离心

动物组织块DNA的提取

实验目的 1. 学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 2. 从肝脏组织中提取到一定量的纯净的DNA样品。 实验原理 DNA是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞;苯酚和氯仿可使蛋白质变性,用其混合液(酚:氯仿:异戊醇)重复抽提,使蛋白质变性,然后离

提取动物组织DNA的方法

【实验步骤】1.组织块解冻,用生理盐水洗去血污,剪取约0.5g组织,剪小放入2.0ml离心管中,用FM-200P研磨45秒;2.加入0.45ml TES混匀,再加入50ul SDS(10%),5.0ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混匀后,于56°C保温4-6h,每2h摇1次。3.放置到室温,加入

小鼠肝组织DNA的提取

实验概要掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法,了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。实验原理真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中,因此制备DNA必须先粉碎组织,裂解细胞膜和核膜,使核蛋白释放,在除去蛋白质、脂类、糖类和   RNA等物质,得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应

用于PCR的模板DNA制备实验——改进的石蜡切片-DNA-提取方法

实验步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上,常规烘片,脱蜡,水化,蒸馏水清洗,无菌蒸馏水浸泡,取出晾至半干。2. 无菌尖头刀片刮下,放入 300~900 μl 组织裂解液中,并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K(PK)10~15 μl,封口膜封口,置 55℃ 3 h 以

特殊组织DNA的提取及鉴定

1、提取DNA的简易方法:1)、从全血中提取DNA:取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中,加500μl左右的ddH2O混匀后,12000rpm离心2分钟,弃上清,(若沉淀中仍 有红细胞,需重复此操作1-2次)加入样品提取液20μl,混匀,100℃煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5

病毒-DNA-的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒-DNA-的提取

实验材料新鲜或冷冻组织试剂、试剂盒匀浆缓冲液裂解液仪器、耗材剪刀匀浆器离心机实验步骤1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织,在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中,按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液,混匀,制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管, 5000 r/min 离心1

靶向序列捕获和新一代测序前对石蜡包埋组织及...(一)

靶向序列捕获和新一代测序前对石蜡包埋组织及新鲜冷冻组织进行DNA质控靶向序列捕获和新一代测序前对福尔马林固定石蜡包埋组织及新鲜冷冻组织进行 DNA 质量控制 作者Melissa Huang Liu安捷伦科技有限公司美国加利福尼亚州拉霍亚Maria Celeste Ramirez安捷伦科技有限公司美国

靶向序列捕获和新一代测序前对石蜡包埋组织及...(二)

捕获前扩增四个 DNA 样品按照样品前处理工作流程(图 1)进行进一步处理。对捕获前扩增样品进行五次 PCR 循环,然后采用 DNA 1000 试剂盒在 2100 生物分析仪上进行分析(图 3)。 图3. 使用 Agilent 2100 生物分析仪及安捷伦 DNA 1000 试剂盒分析所得的捕获前扩

DNA提取方法-影响提取质量的因素-提高提取质量的方法

一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤,是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz等(1985)最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术,是用机械的方法破碎组织,切除多余的石蜡,进入含SDS和高浓度蛋白酶K(1mg/ml)的提取缓冲液加温孵育,然后进行苯酚

植物组织中DNA的提取与测定

一、原理 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。D

组织芯片的制备——石蜡块组织芯片

实验方法原理首先制作模具蜡块(受体,recipient)。从供体蜡块(donor)上取样,取样针分别有 0.6 mm、1.0 mm、1.5 mm 和 2.0 mm 几种,在 1 个大小 45 mm×20 mm 的模具蜡块上,以 0.6 mm 取样针间隔 0.1 mm,可排列 1000 余个位点,如取

病理之组织包埋的步骤

  (1)包埋时的用蜡需预先熔化,充分沉淀后使用。  (2)将熔蜡注入蜡模内,将镊子加温,夹持浸好蜡的组织块,选择好包埋面,将其朝下埋入熔蜡内,用镊子轻轻按压,使组织在蜡中并紧贴蜡模底部。  (3)待熔蜡表面凝固后,可投入流水中、放进冰箱冷冻室或包埋机冷台上促凝。  (4)待蜡完全凝固后脱模,并把蜡

病理之组织包埋的种类

  用于组织包埋的材料有石蜡、碳蜡、树脂、火棉胶和各种塑料等。石蜡是最常用的组织包埋剂。甲基丙烯酸甲酯的硬度很强,多用于未脱钙骨组织的包埋。环氧树脂和甲基丙烯酸甲酯同样需要更复杂的包埋处理过程。Epon主要用于电镜组织的包埋。碳蜡包埋的主要优点是不经过脱水与透明处理,故组织块收缩较少,所以特别适用于

病理之组织包埋的选择

  (1)一般情况下以组织最大面为包埋面。  (2)管状结构的组织以横切面为包埋面。  (3)皮肤组织或有表层上皮的组织,包埋面应垂直于上皮表面。  (4)带有病变特点的组织,或者对包埋面有特别要求的组织应按预先标记的包埋。

什么是组织包埋技术

太高深太转业了。需要现场观察。干冰(固态二氧化碳)温度为摄氏负78.5度。可能是冷冻时间过长温度过低,加上OCT包埋方法不合理所致。推荐:《冰冻切片OCT包埋方法的改进》

组织学——包埋技术

Tissue Preparation for Methy Methacrylate EmbeddingMethyl Methacrylate Embedding Protocols (Energy Beam Sciences, Inc.)General protocol for plastic em

什么是组织包埋技术

太高深太转业了。需要现场观察。干冰(固态二氧化碳)温度为摄氏负78.5度。可能是冷冻时间过长温度过低,加上OCT包埋方法不合理所致。推荐:《冰冻切片OCT包埋方法的改进》

一步脱蜡法在FFPE样本DNA提取中的应用

什么是FFPE福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。FFPE技术的应用福尔马林由于可以与蛋白氨基发

干货!小鼠肝组织dna的提取详细步骤

  实验原理  DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。在匀浆后提取 DNA 的反应体系中, SDS 可破坏细咆膜、核膜,并使组织蛋白与 DNA 分子分离, EDTA 抑制细胞中 DNase 活性,

植物组织石蜡切片的制作

一、实验目的 1.熟练掌握石蜡切片的方法。 2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物的内部结构奠定基础。 3.学会植物内部结构的比较研究方法。 二、实验器具与 试剂1.器具 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻

从动物组织提取基因组DNA

实验概要本实验以哺乳动物新鲜组织为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。实验原理基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀

常规组织样本核酸(DNA/RNA)提取纯化

20 分钟内快速纯化高品质,高产量,即用型 DNA(见图 20)多种规格可选择:Mini Kit 可处理 25 mg 组织,Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样

种子DNA提取仪在黄瓜种子DNA快速提取中的应用

    市面上出售的很多作物种子在正式销售之前,都需要进行种子纯度鉴定,而采用最多的种子纯度鉴定技术为SSR技术,该技术的应用是建立在良好的种子DNA提取方法之上的,因此在进行种子纯度检测的时候,可以利用种子DNA提取仪来快速提取种子DNA。    种子DNA提取仪可以说是实验室样品前处理名副其实

组织芯片特点及其应用前景

组织芯片(tissue chip),也称组织微阵列(tissue microarrays),是将数十个甚至上千个不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一固相载体上,进行同一指标的原位组织学研究。为医学分子生物学提供了一种高通量、大样本以及快速的分子水平的分析工具。 组织芯片是生物芯片技术的一个重要分

LSCM组织的冷冻包埋和切片

组织的冷冻包埋和切片 组织的冷冻方法可根据固定和保存条件不同而不同,尽可能加快冷冻速度以力求减少组织在冷冻 过 程 中 冰晶 的 形 成 。组织冷冻后 ,使用冷冻切片机,将组织切成 5 ~ 15 μm 的切片,粘贴于处理过的载玻片上,室温干燥 1h 后,可进行免疫荧光抗体标记。或放入载玻片盒,- 8

组织包埋时的注意事项

  1、包埋的石蜡温度不宜过高,否则注入模型时,会四处溢流。  2、组织块本身的蜡不能凝固,如果凝固了,应放回重新加温,使其熔化,否则会影响切片,或整块崩出,破坏组织块。  3、包埋完后,应待蜡块完全凝固,方可放入水中,否则未凝固石蜡会被水挤走,漂浮于水面,造成包埋块蜡块的缺损。  4、小的多块的组

如何选购生物组织包埋机?

包埋机是为切片做准备的设备之一,包埋机的功能就是把石蜡融化成液态,把已经处理好的组织包裹其中,以便于切片机切片。结合市场情况来看,部分厂家的包埋机存在一下问题,希望病理工作人员和设备科在选购包埋机时能引起重视:一、漏蜡或流蜡不止--漏蜡的原因有很多,主要有两个方面是造成漏蜡的重点因素:(1)生产厂家

DNA提取仪应用领域

几乎在每个实验室,与生物分子相关的分离纯化工作都是十分重要,且必不可少的。但要对多个样品进行纯化还是相当困难的,不仅需要选择合适的纯化技术,而且工作量也特别大,很难满足当前飞速发展对高通量样品进行提取纯化的需求。TIANLONG NP968磁珠提取纯化系统是使用磁珠法技术,可同时操作1-32个样