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mRNA显示蛋白的筛选与扩增实验

基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白 试剂、试剂盒 NaOH HCl NaCl MgCl2 乙醇 1-丁醇 苯酚 氯仿 异戊醇 EDTA PCR 缓冲液 ATP 琼脂糖 ATP-适配体筛选结合缓冲液 ATP-适配体筛选洗脱缓冲液 ......阅读全文

新型RNA修饰m1A与m7G的物种保守性和动态调控条件

表观转录组学”是通过转录后修饰影响RNA的结构和功能,是近几年来生物学科里最热门的研究领域之一,目前已知的RNA修饰类型超过150种,其中包括m6A、m5C、m1A、m7G、2’-氧-甲基化、ac4C RNA乙酰化等。近期小编发现在探究RNA修饰领域中,各位m6A研究领域的鼻祖们又有了新的动作。

pre-mRNA中存在的修饰及其对剪接影响

  2018年10月7日 讯 /生物谷BIOON/--日前,作为“诺贝尔奖风向标”的拉斯克奖——拉斯克·科什兰医学特殊成就奖颁给了Joan Argetsinger Steitz教授(致敬Joan Steitz!2018年拉斯克特别成就奖获得者),以表彰她在生物医学领域,尤其是RNA生物学领域中所发挥

研究人员使用mRNA首次实现SARS-CoV-2病毒样颗粒的表达

  疫苗是传染性疾病预防和控制方面最有效的手段,近日,复旦大学生命科学学院和附属中山医院林金钟团队联合上海交通大学徐颖洁团队和上海蓝鹊生物医药公司(蓝鹊生物)在新冠病毒mRNA疫苗研究方面取得重要突破。2月25日,相关论文以“Towards an effective mRNA vaccine aga

mRNA的提取及纯化(磁珠法和亲和柱层析法)

真核细胞的mRAN是单顺反子,其最显著的特征是具有5'端帽子结构和3'端的poly A的结构,此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径,人们利用碱基配对原理,采用寡聚T结构作为亲和柱材料,当含mRNA的总RNA样品流经寡聚T柱时,mRAN即被特异性的结合到柱上,从而可与

通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验

细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。实验材料DEPC细胞多聚核糖体RNA底物试剂、试剂盒乙酸钾乙酸镁DTTTris-乙酸

小分子RNA

RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”,但越来越多的证据清楚的表明,RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰(RNA interference)的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识,更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具,

一文速览丨2019年曹雪涛团队在Science,PNAS发表成果盘点

  2019年,曹雪涛团队在Science,Nature Immunology,PNAS 等杂志上发表了13篇重要研究成果,在免疫学领域取得重大进展,iNature系统盘点一下曹雪涛团队的研究成果:  【1】干扰素-γ(IFN-γ)对于细胞内细菌固有的免疫反应至关重要。 非编码RNA和RNA结合蛋白

与时间赛跑!国内外企业/机构新冠病毒疫苗研发纪实

  过去5年间,全世界经历了多次病毒疫情的突然爆发,包括非洲埃博拉病毒疫情,美洲寨卡病毒疫情,中东呼吸综合征疫情和此次新型冠状病毒疫情。  与过历次疫情不同的是,借助先进的技术手段,此次疫情中我国研究团队得以快速分离出病毒并获得了新型冠状病毒的基因序列信息。1月12日,世界卫生组织宣布已收到中国分享

核糖体失活展示系统实验

实验材料 RTA 基因试剂、试剂盒 结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材 RNeasy™mini 试剂盒实验步骤 这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子

核糖体失活展示系统实验

实验材料RTA 基因试剂、试剂盒结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材RNeasy™mini 试剂盒实验步骤这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和

通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验

实验方法原理 细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。实验材料 DEPC细胞多聚核糖体RNA底物试剂、试剂盒 乙酸钾乙酸镁DTTTris-乙酸组织培养液无菌去离子水磷酸肌酸ATPGTP乙酸钾精胺RNase 抑制剂仪器、耗材 高温烤箱匀浆器研杵低速离心机超速离心机

RT-PCR在基因表达(gene expression)检测中的应用

基因表达的检测有几种方法。经典的方法(仍然重要)是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术 的运用,现在有可能检测.分析任何基因的转录产物。目前有好几种方

生物物理所等揭示锌指抗病毒蛋白ZAP抑制mRNA表达新机制

     9月28日,EMBO J.在线发表了中科院生物物理研究所高光侠实验室的最新研究成果,题为Translational repression precedes and is required for ZAP-mediated mRNA decay。该成果揭示了宿主

真核表达文库的构建与筛选实验

类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段:1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库;2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体

曹雪涛课题组:m6A介导的细胞代谢重编程抑制病毒感染

  病毒感染可以调节宿主细胞的代谢,从而影响病毒的存活或清除。RNA修饰,特别是最为常见的哺乳动物mRNA修饰---N6-甲基腺苷(m6A)---能够调节基因表达和病毒感染。比如,m6A甲基转移酶复合物组分METTL3/14限制寨卡病毒产生,而m6A去甲基酶ALKBH5和FTO增强这种病毒的产生。在

核糖体失活展示系统实验

核糖体失活展示系统             实验材料 RTA 基因

通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验

            实验方法原理 细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。 实验材料

最大 IPO 名不副实?mRNA 疗法需要更多的时间证明自己

  最近,生物科技界又一只独角兽正式登陆纳斯达克。  美东时间 12 月 6 日,主打信使 RNA(mRNA)疗法的生物技术新锐公司 Moderna Therapeutics 公布首次公开募股,股票代码为 MRNA,预计以 23 美元/股的价格发行 2630 万股,融资将超 6 亿美元,所募集资金后

外源基因在原核细胞中的表达系统

外源基因在原核细胞中表达是基因工程操作中最初取得成功的途径。1 原核生物基因表达的特点同所有的生命过程一样,外源基因在原核细胞中的表达包括两个主要过程:即 DNA转录成mRNA和 mRNA翻译成蛋白质。与真核细胞相比,原核细胞的表达有以下特点:①原核生物只有一种RNA 聚合酶(真核细胞有三种)识别原

4.3 非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统

非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统由于具有转移定位、信号肽的切除和糖篇化的能力,因此对于绝大多数的外源性 mRNA 都具冇持续性的修饰加工能力。由于其膜的稳定性高,因此可使用蔗糖密度梯度离心或蛋白酶保护反应等方法分析转录产物的定位。实验材料成年雌性非洲爪蟾抑肽酶tRNA蛋白酶 K仪器、耗材离心机冷室实验步

【Science特刊】RNA中的信号

  6月17日的Science出了一期关于RNA的特刊。RNA与基因表达的分子生物学紧密相关:有形成特定结构的能力;作为信号载体;对自身的调节。例如非编码小分子RNA,已知是基因表达的调控因子,和哺乳动物干细胞基因表达变化相关,而这种变化反过来和胚胎发育过程中细胞命运的决定有联系。  DNA甲基化是

Genome research:不同RNA m5C甲基化修饰存在巨大差异

  导读   近年来,RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域最前沿最热门的研究方向之一,不断有CNS的文章问世,m5C RNA修饰的分子机理研究越来越清晰,也不断有学者探寻如何更全面的获得贴近真实的m5C修饰的原貌。近期,来自德国的Frank Lyko和Mark Helm团队在GENOME RES

cDNA文库构建

cDNA文库构建可以:(1)用于分离全长基因进而开展基因功能研究;(2)筛选目的基因并直接用于表达;(3)提供构建分子标记连锁图谱的所用探针。实验方法原理cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。经典 cDNA 文库构建

真核表达文库的构建与筛选实验

            实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌

Genome research:不同RNA m5C甲基化修饰存在巨大差异

  近年来,RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域最前沿最热门的研究方向之一,不断有CNS的文章问世,m5C RNA修饰的分子机理研究越来越清晰,也不断有学者探寻如何更全面的获得贴近真实的m5C修饰的原貌。近期,来自德国的Frank Lyko和Mark Helm团队在GENOME RESEARCH(

非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统

            实验材料 成年雌性非洲爪蟾 抑肽酶 tRNA 蛋白酶 K

Science:蛋白质翻译的真相

  Yeshiva大学的科学家们开发了一个新荧光标记技术,首次确定了蛋白质合成的时间和地点。该技术允许研究者在活细胞中直接观察mRNA分子翻译成蛋白质的过程,有助于揭示蛋白质合成异常引发人类疾病的具体机制。这项研究发表在三月二十日的Science杂志上。  “过去我们一直没能确切查明mRNA翻译成蛋

云序客户再发高分文章,教你如何玩转tRNA机制研究

  “忽如一夜春风来,千树万树梨花开!”自然界的花花草草在悄无声息的感受着大自然的变化。随着全球气候的变化,环境温度也在不断的变化,那么什么是温度感受器?AET1是tRNA上鸟苷转移酶,它是水稻高温条件下正常生长所必需的。本文研究结果表明,tRNAHis鸟苷转移酶AET1在植物应对高温环境中发挥着重

原位分子杂交和免疫组化SP法对PTEN的检测

原位分子杂交和免疫组化SP法对PTEN的检测 【摘要]目的:研究原位分子杂交和免疫组化sP法检测PTEN mRNA及其蛋白在HCC中的表述隋况。方法:56例肝细胞肝癌组织、17例肝硬化组织手术切除标本,经40g/L福尔马林固定,4 m厚连续切片,HE染色,病理诊断证实。结果:HCC组织中,

清华学者揭示新的mRNA翻译终止机制

   2016年12月1日,清华大学生命科学学院、结构生物学高精尖创新中心高宁课题组和合作者在《Nature》在线发表题为Mechanistic insights into the alternative translation termination by ArfA and RF2的研究论文。该论