真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今日已取得令人瞩目的成就 。随着人类基因组计划的完成，越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明。利用表达系统在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA段的载体 (一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌)，通过IPTG诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点：如通常使用......阅读全文
细菌与真核细胞的的区别
细菌与真核细胞存在着很大的区别，但也有相同之处。细菌与真核细胞的转染有何异同准确来说，细菌叫“转化”，真核细胞叫“转染”。转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNAinterfere
真核细胞基因组的特点
(1)主要存在于细胞核内，少量存在于线粒体中。(2)为单顺反子，表现为一个结构基因经过转录后生成一个单顺反子mRNA分子，翻译成一条多肽。(3)基本上没有操纵子。(4)为断裂基因，内含子占绝大多数，不翻译成蛋白质；外显子占少数，可以翻译成蛋白质。(5)具有较高重复序列。(6)具有多基因家族基因和假基
真核细胞蛋白质合成过程
真核细胞中，核糖体进行蛋白质合成时，既可以游离在细胞质中，称为游离核糖体（freeribosome）。也可以附着在内质网的表面，称为膜旁核糖体或附着核糖体。参与构成RER，称为固着核糖体或膜旁核糖体，是以大亚基圆锥形部与膜接着游离核糖体（freeribosome）。分布在线粒体中的核糖体，比一般核糖
关于真核细胞翻译的终止过程
A. 肽链的释放 （1）eRF3充当类似于eEF1（或EF-Tu）的作用，以GTP结合状态结合到eRF1/2上； （2）通过eRF3的介导，eRF1/2被运输到A位点； （3）eRF1/2识别终止密码子（类似于tRNA的密码子配对），正确的构象传递使得核糖体FBS和eRF3的GTP结合位点
真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
关于真核细胞细胞色素的特征分布特点
真核细胞（动物、植物、酵母、脉孢菌）的线粒体膜和某些细菌的细胞质膜上的氧化磷酸化电子传递链中，细胞色素包括：Cyt a、Cyt a3、Cyt b、Cyt c、Cyt c1，除Cyt c外其他都是紧密结合在线粒体内膜上，Cyt c1因呈现水溶性，故与线粒体内膜结合不紧密。它们的氧化还原电位（电子亲
真核细胞型微生物的形状
真核微生物是细胞核具有核膜、核仁，能进行有丝分裂，细胞质存在线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生物。其广泛分布于自然界，种类很多，形态各异。
脂质体介导的真核细胞转染实验
脂质体介导短暂表达 脂质体进行稳定转染 哺乳动物细胞的选择标记 实验材料 哺乳动物细胞
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法l 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞1. 转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法* 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀：
真核细胞总RNA的提取与鉴定
【原理】RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的，也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5%。虽然mRNA大小和序列各不相同，但在多数真核细胞mRNA的
真核细胞的基本结构和功能单位
细胞是一切生命活动的基本结构和功能单位。一般认为： 1.细胞是由膜包围的原生质（protoplasm）团，通过质膜与周围环境进行物质和信息交流； 2.是构成有机体的基本单位，具有自我复制的能力，是有机体生长发育的基础； 3.是代谢与功能的基本单位，具有一套完整的代谢和调节体系； 4.是遗
脂质体介导的真核细胞转染实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM仪器、耗材 培养皿培养箱聚苯乙烯管实验步骤 1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片
真核细胞基因组DNA的提取
实验概要高等动物，高等植物的基因组相当庞大，如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有1.4×108个碱基对，水稻基因组有1.4×109个碱基对。真核细胞基因组中，约1万－1.5万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖
真核细胞型微生物的简介
真核细胞型微生物包括了真菌、真核藻类和原生动物。真菌的种类极多，是微生物中的一个庞大类群，据统计，真菌约有12万多种。真菌的菌体为单细胞或多细胞的分枝丝状体，或为单细胞的不分枝的个体。真菌细胞中没有光合色素，不能进行光合作用。真菌包括了单细胞的酵母菌、单细胞或多细胞的丝状霉菌以致产生子实体的蕈菇
真核细胞总RNA的提取与鉴定
【原理】RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的,也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5μg RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5%。虽然mRNA大小和序列各不相同，但在多数真核细胞m
真核细胞的减数分裂过程
减数分裂是真核细胞中一种特殊类型的细胞分裂，指通过两个细胞周期使染色体数目减少一半的细胞分裂方式。减数分裂只有出现在进行有性生殖的生物的生殖细胞中，于1883年由Beneden最先阐述。由于发生在生殖细胞成熟过程中，所以又有成熟分裂（maturation division）之称。通过减数分裂使亲代与
磷酸钙介导的真核细胞转染实验
磷酸钙法 高效转染法 实验材料 真核细胞 试剂、试剂盒
真核细胞起始复合物的形成过程
翻译起始也是由eIF-3结合在40S小亚基上而促进80S核糖体解离出60S大亚基开始，同时eIF-2在辅eIF-2作用下，与Met-tRNAfmet及GTP结合，再通过eIF-3及eIF-4C的作用，先结合到40S小亚基，然后再与mRNA结合。mRNA结合到40S小亚基时，除了eIF-3参加外，还需
真核细胞蛋白质合成的相关介绍
真核细胞蛋白质合成的起始真核细胞蛋白质合成起始复合物的形成中需要更多的起始因子参与,因此起始过程也更复杂。 ⑴需要特异的起始tRNA即,-tRNAfmet,并且不需要N端甲酰化。已发现的真核起始因子有近10种（eukaryote Initiation factor,eIF） ⑵起始复合物形成
磷酸钙介导的真核细胞转染实验
实验材料 真核细胞试剂、试剂盒 CaCl2HEPES缓冲液氯化铯PBS仪器、耗材 培养箱锥形管离心管实验步骤 1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养
电穿孔转染真核细胞实验——植物原生质体细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易实验材料原生质体细胞试剂、试剂盒电穿孔缓冲液原生质溶液仪器、耗材尼龙筛网锥形管实验步骤1. 将小心切成
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）2
Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective: To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials Denaturing Solution
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
用小鼠L型成纤维细胞来进行条件优比的，但只需稍做修改即可适用于几乎任何细胞。根据所研究的细胞类型进行方法优化十分关键。实验材料DNA试剂、试剂盒TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
基本方案 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
研究揭示真核细胞自噬调控新机制
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/9/508113.shtm近日，中国科学院广州生物医药与健康研究院研究员张小飞团队揭示了E3泛素连接酶MARCH7通过泛素化修饰ATG14抑制自噬，导致蛋白聚集体通过自噬途径降解受阻的机制。相关成果发表于Cel
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）1
从细胞中分离RNA的纯度于完整性对于许多分子生物学实验至关重要。如Northern印迹与杂交分析、寡聚（dT）纤维素选择分离 mRNA，cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上决定于RNA的质量。RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。快速一步法提取总RNA组织及有核细胞在匀浆过程中
真核细胞型微生物的致病性
皮肤感染真菌后，在局部大量繁殖，通过机械刺激与其代谢产物的作用，引起局部炎症—深部组织，脏器感染的真菌遭吞噬细胞吞噬后，不被杀死而能在细胞内繁殖，刺激组织增生，引起组织慢性肉芽肿性炎症和组织坏死。
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。 2. 对每个待转染培养皿，用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA，在组织培养橱中晾干沉淀，重悬于40 μl
外源基因在真核细胞中的表达系统
1. 真核生物表达的优越性和必要性① 真核生物具有转录后加工系统，可识别并删除基因中的内含子，剪切加工为成熟mRNA.②具备完善的翻译后加工系统，可进行糖基化、乙酰化等修饰，使蛋白形成正确的天然构型，因而真核生物表达系统产生的蛋白更接近天然状态，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核细胞可将基因表