内含肽的分离纯化
内含肽具自切割特性的这种特性而实现目标蛋白与亲和标签分离的目的。内含肽在蛋白质纯化中的应用修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起，在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体，利用修饰后的内含肽构建的蛋白纯化载体可以将目的蛋白直接融合表达于内含肽的N端或C端，几丁质结合域(chitin binding domain，CBD，5kDa，环状芽孢杆菌)融合表达于内含肽的另一端或内部。当这个“三元”融合蛋白复合物流经结合有几丁质的亲和纯化柱时，再利用固定在树脂上的配体吸附三联体的标签而截留融合蛋白，随后在某些简单的理化因素作用下(如pH、温度的变化或者巯基化合物的加入)该三联体从内含肽的N一端或者C端端发生自切割释放目标蛋白，而此内含肽与CBD的复合物结合在亲和纯化柱上，目的蛋白直接洗脱下来。传统的亲和纯化方式是指利用基因融合技术将亲......阅读全文
内含肽的分离纯化
内含肽具自切割特性的这种特性而实现目标蛋白与亲和标签分离的目的。内含肽在蛋白质纯化中的应用修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起，在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体，利用修饰后的内含肽构建
概述内含肽的分离纯化的介绍
内含肽具自切割特性的这种特性而实现目标蛋白与亲和标签分离的目的。内含肽在蛋白质纯化中的应用修饰后(位点特异性突变)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起，在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体，利用修饰后的内含肽
内含肽
内含肽intein是位于宿主蛋白质中的一段插入序列，前缀in一取自inventing, 后缀tein一取自protein。与内含肽相对应的另一专用术语是外显肽。内含肽基因不是一个独立的基因， 必须插入于外显肽基因才能复制转录，可从前体蛋白中切除并将两侧外显肽连接起来成为成熟蛋白质。其对应的核苷酸序列
内含肽的种类
从内含肽的内部有无自导引归巢核酸内切酶结构域，可将内含肽分为2种类型。一种是全功能型内含肽(maxi—intein)，具有蛋白剪接活性和自导引核酸内切酶序列(homingendonuclease)；另一种是微型内含肽(mini—intein)，只有蛋白剪接活性。其中自导引归巢核酸内切酶结构域的缺失在
内含肽的结构
被人们公认的标准内含肽的结构模体为：N端剪接区+中部归巢核酸内切酶区域+ C剪接区域 。两端剪接区参与蛋白质的剪接，中部区域参与蛋白质归巢过程，少数内含肽不含核酸内切酶区域。全功能型内含肽包括8个保守区或基序，一般由244～1650个氨基酸碱基组成，大部分在500个氨基酸残基左右。自导引归巢核酸内切
内含肽的应用-内含肽可作为治疗线粒体疾病药物靶标
内含肽可作为治疗线粒体疾病药物靶标粒体DNA(mtDNA)突变，将导致mtDNA编码、与氧化磷酸化有关的13种蛋白质的突变，从而起很多罕见的疾病，这也可能是人类衰老的原因之一。由于该13种蛋白质高度的疏水性，通过转基编码表达的有生物活性的蛋白质很难从细胞质中进入线粒体。根据内含肽的作用机制，首先在胞
内含肽的作用机制
内含肽剪接是一个快速、高效的反应过程，前体蛋白在细胞中几乎分离不到。反应亦不需要任何辅助因子、酶和ATP能量，其催化结果是将内含肽两侧的外显肽通过肽键连接成成熟的天然肽。基于剪接位点氨基酸残基的化学性质以及带分支的剪接中间产物分子的发现，人们提出了多种假说来描述这一反应过程。目前被普遍接受的剪接机制
内含肽的应用介绍
内含肽序列加上C端外显肽的第一个氨基酸残基包含了蛋白剪接的全部信息，甚至可以介导非“原配”的外源蛋白质的剪接。内含肽与上游和下游的外显肽序列之间几乎没有同源性，所以，如果外源目的蛋白替换天然外显肽，内含肽仍然可以保持剪接活性。但是利用好这一特点对蛋白质人工剪接需要考虑一些影响因素：外源蛋白及剪接位点
关于内含肽的应用介绍
内含肽序列加上C端外显肽的第一个氨基酸残基包含了蛋白剪接的全部信息，甚至可以介导非“原配”的外源蛋白质的剪接。内含肽与上游和下游的外显肽序列之间几乎没有同源性，所以，如果外源目的蛋白替换天然外显肽，内含肽仍然可以保持剪接活性。但是利用好这一特点对蛋白质人工剪接需要考虑一些影响因素：外源蛋白及剪接
关于内含肽的种类介绍
从内含肽的内部有无自导引归巢核酸内切酶结构域，可将内含肽分为2种类型。一种是全功能型内含肽(maxi—intein)，具有蛋白剪接活性和自导引核酸内切酶序列(homingendonuclease)；另一种是微型内含肽(mini—intein)，只有蛋白剪接活性。其中自导引归巢核酸内切酶结构域的缺