多囊卵巢综合征病人基因组DNA甲基化免疫沉淀反应分析
多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)是一种复杂的、病因不明的疾病，最新研究结果表明，胰岛素耐受(insulin resistance , IR)在PCOS的发生过程中起了重要的作用。本研究主要致力于探究IR在PCOS发生过程中的分子机制，运用基因组DNA甲基化免疫沉淀技术(methylated DNA immunoprecipitation , MeDIP)，分析了正常人与PCOS病人基因组中有差异的甲基化基因，此外，还鉴别了胰岛素不耐受的PCOS病人(PCOS-non-insulin resistance , PCOS-NIR)与胰岛素耐受的PCOS病人( PCOS insulin resistance , PCOS-IR)差异的甲基化基因。结果表明，PCOS-NIR与PCOS-IR病人有79个差异的甲基化基因，PCOS病人与正常人有40个差异的甲基化基因......阅读全文
免疫沉淀（Immunoprecipitation,－IP）实验方法
基本实验步骤 （1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清； （2） 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解
免疫沉淀（Immunoprecipitation）实验材料和方法
免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。材料：上样buffer的配方(用前现配):2ul 1.25M Tris-HCL , pH 6.835ul distilled water2.5ul 2-mercaptoethanol12.5ul 10%SDS10ul 80% glycerol2ul br
如何看免疫沉淀的结果图
图a中，每个基因都在3'末端添加了一个V5标签，正常表达后，其产物蛋白的C末端都会携带一段V5标签（9个或14个氨基酸，通常不影响蛋白功能），那么这样一来，只要用抗V5标签的抗体检测到了目标蛋白，那么就可以说明这个转入的基因表达了。图b中，左边是3个基因在成纤维细胞中的表达情况，左侧的数字为
大鼠ELISA试剂盒免疫沉淀技术
因此组织不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA对组织内抗原（先与IgG结合）的定位，反应时间可以延长，大鼠ELISA试剂盒便于渗透入组织细胞内，且没发现严重的物理吸附现象。在PPA实验中稀释液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1缓冲液（2.42
表达蛋白检测实验_免疫沉淀法
实验方法原理使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时，利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。试剂、试剂盒磷酸缓冲液（PBS）细胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸仪器、耗材完全 MEM-5 培养基（含和不含蛋氨
染色质免疫沉淀技术的应用
随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域，要想提供蛋白因子直接调控的证据，需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用，而染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）就是一种研
蛋白质分离和分析——免疫沉淀
实验步骤 基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀材 料未标记或标记的细胞悬液P B S ，冰预冷非变性裂解缓冲液，冰预冷5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0
免疫沉淀实验——制备抗体Sepharose－偶联物
实验材料蛋白质试剂、试剂盒NaClNa2CO3乙腈溴化腈甘氨酸仪器、耗材透析管滤纸实验步骤1. 1 ~30 mg/ml 的抗体在 4℃对 0.1 mol/l NaHCO3 / 0.5 mol/l NaCl透析 24 h，期间换液3次。透析液的体积应500倍于抗体溶液。2. 于4℃10 000 g
免疫沉淀常见问题及对应解答
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。免疫沉淀要求抗原的纯度尽可能提高。降低本底，用不与待检抗原结合的非特异性抗体预处理，可以从抗原溶液中除去非特异性结合蛋白，即此法次是用非免疫抗体降低本底，第二次再用所研究的抗体，这样进行二次免疫沉淀是达到纯化免疫沉淀物*有效的方法。今天上海劲马
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物，蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋白质
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗？近年来在原核表达体系中，谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍，它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在
组织免疫沉淀中染色质的制备
实验概要此步骤描述了从组织中制备染色质，以用于后续的染色质免疫沉淀反应。每个免疫沉淀/抗体反应推荐使用肝组织 30 mg，但组织使用量可根据实际进行调整。每种组织的用量依据组织蛋白丰度、抗体亲和力和交联效率而定。每个免疫沉淀反应最适染色质的量为 5-15 μg 。每次交联免疫沉淀反应之前，需根据不同
放射免疫沉淀法的概念
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
关于免疫沉淀实验一抗的选择介绍
某些目的蛋白因为没有对应的特异性抗体而无法进行免疫沉淀，如抗体所识别的抗原表位被相互作用所遮蔽，无法与目的蛋白相互作用或抗体选择不合适，所选抗体不能识别处于天然构象的蛋白等，可以采用一个表位标记蛋白质，再选择针对此表位的标签抗体来进行免疫沉淀。（铭研生物提供的标签抗体用于IP实验，涉及FLAG、
用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验
方法A:单层培养的细胞的裂解 方法B:悬浮生长的细胞的裂解 实验方法原理 培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充
免疫沉淀（IP）的常见问题及解答
1. 用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验？ 答：抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同，和抗原以及Protein G或Protein A的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。 一般来说，多抗是沉淀反应最好的选择。另外，纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫
放射免疫沉淀法技术特点
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验
实验方法原理 培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表位的性质来决定。实验材料 单层细胞或悬浮细胞试剂、试剂盒 裂解缓冲
免疫沉淀法的基本原理
RIP 实验基本原理：1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方
染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点
染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体的特异性反应，可以真实地反映体内蛋白分子与基因组DNA结合的状况。下面我们就最基本的实验步骤，实验中的小技巧以及需要注意的问题简单介绍一下。1.
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物，蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋
自然染色质免疫沉淀实验设计
1. The preparation of native chromatin from cultured human cells1.1.Cultured cells (e.g. HL-60 or lymphoblastoids) are grown to a density of approxima
染色质免疫沉淀芯片（ChipChip）
该技术能够快速在目标基因组的染色体中确定特异DNA结合蛋白的准确结合位点，ChIP芯片也可以在一个基因组的任何感兴趣的区域内寻找染色体的结构改变。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因组范围内确定基因转录因子的DNA结合位点和其他DNA结合蛋白或蛋白复合体的DNA结合位点。（2）染色体活性状态的定
免疫沉淀法的基本原理
1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
免疫沉淀法 实验方法原理 通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定
组织免疫沉淀中染色质的制备
实验概要此步骤描述了从组织中制备染色质，以用于后续的染色质免疫沉淀反应。每个免疫沉淀/抗体反应推荐使用肝组织 30 mg，但组织使用量可根据实际进行调整。每种组织的用量依据组织蛋白丰度、抗体亲和力和交联效率而定。每个免疫沉淀反应最适染色质的量为 5-15 μg 。每次交联免疫沉淀反应之前，需根据不同
技术和方案18－染色质免疫沉淀
试剂、试剂盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液免疫共沉淀洗脱液TESTE仪器、耗材超声波粉碎仪实验步骤1.培养要分析的细胞。每一个样品，需要在三角瓶中培养 50~100ml 细胞至 OD600 大约为 1。2.甲醛处理细胞交联蛋白质和 DNA。加甲醛到细胞中至终浓度为 1%(37% 的甲醛按 1
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
（一）原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白 A／G（Protein A／G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子－蛋白A／G或二抗－抗体－目的蛋白复合物，沉淀经洗涤后，重悬于电泳上
简述卵巢肌瘤诊断
卵巢肿瘤不论良性或恶性，早期并无特殊症状，一且出现症状如腹痛、下腹肿块、腹水等情况就诊，此时多属良性肿瘤有并发症或恶性肿瘤晚期。一般临床根据患者的年龄、病史特点、局部体征及妇科检查可初步确定是否为卵巢肿瘤，并对良性或恶性作出估计。诊断困难时可进一步行辅助检查，如B超临床诊断符合率〉90%、病理学
昆虫卵巢解剖
实验概要本实验拟在掌握昆虫卵巢解剖的方法。昆虫的生殖系统是繁衍种族所必需的。由于雌雄生殖腺的发育特点不同，在许多昆虫成虫期只有雌虫仍继续发育，因而一般也只有雌的生殖腺发育被广泛应用。通过对昆虫的生殖生物学的研究，剖析雌性生殖系统的发育进度，对害虫预报具有一定的意义，并且是了解和研究其发生规律的重要的